Il s'agit d'un cylindre métallique à double paroi recouvert d'une enveloppe métallique à l'extérieur. Il est hermétiquement scellé avec un couvercle massif avec quelques vis. Il dispose d'un manomètre avec soupape de sécurité et d'une soupape à vapeur.
Avant la stérilisation, de l'eau distillée est versée dans l'autoclave à travers un entonnoir avec un verre doseur jusqu'au trait indiqué sur le boîtier. Le matériel à stériliser est chargé dans la chambre de stérilisation, fermé hermétiquement avec un couvercle, vissé et la source de chauffage est allumée. Dans ce cas, la vanne de sortie de vapeur est laissée ouverte. La vapeur générée lors de l'ébullition passe entre les parois de l'autoclave et pénètre dans la chambre par les trous de la paroi interne. Lorsqu'il est chauffé, l'air sort d'abord de l'autoclave par la vanne de vapeur, puis de la vapeur. La libération d'un flux continu de vapeur sèche indique le déplacement complet de l'air de l'autoclave : la vanne est fermée, et à partir de ce moment la pression dans l'autoclave commence à augmenter progressivement, la flèche sur le manomètre monte. Le début de la stérilisation est le moment où l'aiguille du manomètre atteint la pression requise.
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La lecture du manomètre correspond à une certaine température de vapeur dans l'autoclave : 0,50 MPa - 112°C, 0,1 MPa - 120, 0,15 MPa - 127, 0,2 MPa - 134°C.
Le matériel dans un autoclave est le plus souvent stérilisé à 0,1 MPa pendant 20-30 minutes. A la fin de la stérilisation, la source de chauffage est éteinte (la flèche du manomètre atteint progressivement le zéro). Après cela, la vanne de sortie de vapeur est ouverte, le reste de la vapeur est libéré. Ensuite, dévissez soigneusement le couvercle et ouvrez-le. Après refroidissement complet, retirez le matériel stérilisé.
En autoclave, vous pouvez stériliser plats, instruments, milieux de culture (hors gélatine et milieux glucidiques), pansements, etc. Lors du travail, vous devez respecter les règles de sécurité. Les personnes qui ont un certificat pour le droit d'utiliser l'autoclave sont autorisées à travailler. L'état de fonctionnement de l'autoclave est vérifié par l'inspection de la chaudière.
L'appareil de Koch (Fig. 4) est un cylindre métallique gainé à l'extérieur d'un matériau (linoléum, amiante) qui ne conduit pas bien la chaleur. De l'eau est versée au fond et le matériel de stérilisation est placé sur un support. L'appareil est fermé par un couvercle conique, qui a des ouvertures pour un thermomètre et une sortie de vapeur. Au fond, il y a un robinet pour évacuer l'eau. La stérilisation est réalisée avec un courant de vapeur à 100°C pendant 30-60 minutes. Dans ce mode, les cellules végétatives des formes de microbes sporulées et non sporulées meurent. La stérilisation fractionnée (trois fois) pendant 30 à 60 minutes pendant trois jours avec un intervalle de 18 à 20 heures vous permet de créer des conditions pour la germination des spores dans les cellules végétatives et de vous en débarrasser. Dans les intervalles entre la stérilisation, les spores germent et, lors du chauffage ultérieur, meurent. L'appareil Koch stérilise les matériaux qui ne peuvent pas supporter des températures supérieures à 100 ° C (gélatine, lait, milieux glucidiques, etc.).
Les milieux protéiques et le sérum sanguin qui ne supportent pas une température de 100°C sont stérilisés de manière fractionnée à 56-58°C au bain-marie.
Armoire de séchage(Four Pasteur) (Fig. 5) est une armoire métallique à double paroi, recouverte d'amiante sur le dessus. La paroi supérieure a des ouvertures pour un thermomètre et une ventilation. L'air chauffé monte du bas entre les murs et par l'ouverture supérieure pénètre dans l'armoire, où le matériel à stériliser est placé sur les étagères. La stérilisation s'effectue à chaleur sèche à 150"C pendant 2 heures, à 165-170°C pendant 45 minutes, à 180°C pendant 15 minutes. La verrerie est stérilisée dans un four Pasteur. Après stérilisation, l'armoire est déconnectée du source de chaleur et ouvert seulement après refroidissement.
Filtres bactériens utilisé pour stériliser les liquides sans chauffer. Il s'agit notamment des filtres à amiante Chamberlain, Berkefeld et Seitz (plaques).
Les bougies filtrantes (Fig. 6) sont des cylindres creux constitués de substances finement poreuses : du kaolin avec un adjuvant Le sable de quartz(bougies Chamberlain) et de la terre à infusion (bougies Berkefeld). Les suppositoires Chamberlain ont des pores de différentes tailles à travers lesquels passent les microbes. Les bougies qui laissent passer les grosses bactéries sont désignées par les lettres L9, L1 (bis), L3, moyenne - L5, L7, la plus petite - L9, L11 , L13 Par porosité, les bouchons de Berkefeld sont désignés W, N, V(les plus gros pores sont dans les bougies de la marque U).
Les filtres Seitz sont des plaques d'amiante de différentes tailles. Lors du montage de l'appareil pour la stérilisation, la plaque est placée sur une grille entre des disques métalliques (avec un trou au milieu), qui sont fermement pressés les uns contre les autres avec des vis. Le filtre assemblé est inséré à travers un bouchon dans un flacon avec une branche latérale (flacon Bunsen) et un tube en caoutchouc, enveloppé dans du papier et stérilisé dans un autoclave à 120 ° C pendant 20-30 minutes.
Pour filtrer la matière, un vide est créé dans la fiole Bunsen en connectant un tube en caoutchouc avec une huile raréfiante pompe à main Komovsky ou une pompe à vide électrique.
Achèvement des travaux. Les microbes sont cultivés de manière optimale conditions de température... Pour cela, les laboratoires utilisent des thermostats à air ou à eau.
(fig. 7) est une armoire métallique à double paroi, entre laquelle se trouve une couche d'eau ou d'air. La partie extérieure du thermostat est recouverte d'un matériau peu conducteur de la chaleur (amiante, linoléum).
Riz. 4, 5, 6.
À l'intérieur du thermostat, il y a des étagères pour placer l'inoculum des micro-organismes cultivés. Une température constante dans le thermostat est maintenue à l'aide d'un thermostat, qui est monté dans le couvercle supérieur du thermostat. Le dispositif thermostatique est basé sur le principe expansion linéaire substances. Les régulateurs de température sont un alliage de deux métaux quelconques avec des coefficients de dilatation thermique différents (laiton, zinc) ou un "oreiller" métallique rempli d'alcool, d'un mélange d'alcool et d'éther, de mercure ou d'autres substances qui changent de volume à une certaine température. Lorsque le thermostat chauffe au-dessus de la vitesse définie, les métaux se dilatent, les contacts s'ouvrent et le flux de chaleur supplémentaire est automatiquement retardé. Une fois que la température baisse, il s'allume électricité et le flux de chaleur est repris.
1. flamboyant(de lat.flamma - flamme et fr.flamb é - brûlure) - stérilisation en enflammant de petits objets en métal ou en verre dans une flamme. De cette façon, les boucles bactériologiques, les pincettes métalliques, les spatules et les tubes en verre, les lames de verre, etc.. La température de la flamme est d'environ 1000 ° C. Lorsqu'ils sont enflammés, tous les micro-organismes (formes végétatives et sporulées) brûlent. C'est une méthode de stérilisation rapide et fiable.
2. Ébullition... Est l'un des plus moyens simples stérilisation. Elle est réalisée dans un stérilisateur - une boîte rectangulaire en métal avec un couvercle et une grille au fond pour stocker les articles à stériliser. De l'eau y est versée et portée à ébullition (chauffage électrique ou au feu). L'ébullition peut durer de 15-30 minutes à 2 heures à une température d'environ 100 ºС. Les petits objets en métal ou en verre sont stérilisés - seringues, aiguilles, tubes en verre, etc. Dans ce cas, les formes végétatives de micro-organismes et une partie des spores meurent. Ils s'entraînent également à ébouillanter le matériel stérilisé avec de l'eau bouillante.
3. Stérilisation à la chaleur sèche. Il est produit à l'air chaud dans une étuve ou une étuve Pasteur. Le four Pasteur est une armoire à double paroi doublée d'amiante à l'extérieur pour l'isolation thermique. À l'intérieur de l'armoire, il y a des étagères métalliques avec des trous sur lesquelles est placé le matériel à stériliser. Chauffage électrique. La stérilisation est effectuée à une température de 160-180 ºС dans les 1-2 heures suivant le moment où ces températures sont atteintes (contrôlées par un thermomètre). La chaleur sèche stérilise principalement la verrerie - boîtes de Pétri, pipettes, spatules (emballées dans du papier), ainsi que tubes à essai, flacons. Cette technique est fiable - les formes de micro-organismes sans spores et spores meurent. Le matériel enveloppé de papier et stérilisé peut être stocké.
4. Stérilisation à la vapeur d'eau... Elle est réalisée à l'air chaud humide dans un appareil de Koch. L'appareil de Koch (chaudière) est un cylindre métallique, qui peut être sur pattes et recouvert de linoléum. Une quantité d'eau est versée dans l'appareil pour qu'elle n'atteigne pas le rebord sur lequel est placé un cercle métallique troué et le matériau stérilisé par-dessus. L'appareil est hermétiquement fermé avec un couvercle conique avec un trou au milieu pour que la vapeur s'échappe et chauffé sur un feu. Lorsque l'eau bout, de la vapeur d'eau chaude d'une température d'environ 100 ºС "s'écoulera" en un fort courant du trou du couvercle. A partir de ce moment, l'heure de début de la stérilisation est notée. La stérilisation à la vapeur d'eau dure de 45 minutes à 1,5 heures, selon le volume de matériel stérilisé. Ils stérilisent les milieux nutritifs qui ne peuvent pas être chauffés au-dessus de 100 ºС, par exemple, MPF (à des températures supérieures à 100 ºС, il se liquéfie et ne se solidifie pas). Cette méthode de stérilisation n'est pas entièrement fiable - seules les formes végétatives de micro-organismes sont complètement tuées et les spores restent. Pour obtenir une stérilisation complète des milieux dans l'appareil Koch, une stérilisation fractionnée est utilisée.
5. Stérilisation à la vapeur sous pression (autoclavage). Elle est réalisée avec de la vapeur saturée en autoclave. Les autoclaves sont différents modèles... L'autoclave vertical est une chaudière massive à double paroi, entourée à l'extérieur d'un boîtier métallique, avec un lourd couvercle à charnière vissé fermement à la chaudière avec des boulons. Dans la partie inférieure de la chaudière, il y a un entonnoir et un robinet à travers lesquels de l'eau est versée dans l'espace libre entre la chaudière intérieure et le boîtier. Le matériel à stériliser est placé sur le fond de la chaudière, le couvercle est bien vissé, le chauffage électrique est allumé. Lorsque l'eau commence à bouillir, la vapeur s'écoule dans la chaudière intérieure. La pression dans l'autoclave augmente et la température augmente en même temps. Lorsque le manomètre indique que la pression dans la chaudière a atteint la valeur définie, notez l'heure de début de la stérilisation. La pression est maintenue à un certain niveau au moyen d'une soupape de sécurité.
Habituellement, dans la pratique du laboratoire, la stérilisation sous pression est effectuée à 1,5-2 atm et à une température d'environ 115-120 ºС pour
20-30 minutes Une fois le temps de stérilisation écoulé, le chauffage est arrêté, la vanne de vapeur est ouverte et la vapeur est libérée. Les milieux nutritifs MPB, MPA, verrerie à l'eau sont stérilisés à la vapeur sous pression, pansement, Instruments chirurgicaux etc. L'autoclavage est une méthode de stérilisation rapide et fiable, qui tue toutes les formes de micro-organismes, même les spores les plus résistantes.
6. Pasteurisation. Cette technique de stérilisation partielle porte le nom du scientifique français L. Pasteur qui l'a proposée. La méthode consiste dans le fait que le liquide versé dans des plats stériles est chauffé dans un bain-marie à une température de 60-90 ºС pendant
10-30 minutes Il est utilisé pour les milieux liquides qui modifient leurs propriétés physico-chimiques à haute température. Le lait, la crème, le vin, la bière, les jus… sont pasteurisés, les vitamines et le goût des produits sont préservés. Les produits pasteurisés ne sont pas soumis à un stockage à long terme, car avec cette méthode de stérilisation, seules les formes végétatives de micro-organismes meurent et les spores restent. Dans la pratique en laboratoire, cette méthode est principalement utilisée pour séparer les espèces sporulées des espèces non sporulées.
7. Stérilisation fractionnée... Basé sur le traitement du matériel stérilisé en plusieurs étapes. Les fractions peuvent être bouillies ou stérilisées à la vapeur dans un appareil Koch. Habituellement, la stérilisation est effectuée pendant 3 jours pendant 30 minutes par jour par l'une des méthodes indiquées, et pendant les pauses, laissez le milieu à température ambiante... Ceci est fait pour provoquer la croissance des spores en formes végétatives et pour les détruire lors des traitements ultérieurs, ce qui augmente la fiabilité de ces méthodes.
8. Tyndalisation. Il s'agit d'une sorte de stérilisation fractionnée (pasteurisation fractionnée). La réception porte le nom du scientifique anglais D. Tyndall, qui l'a proposée. Il est effectué dans un bain-marie à une température de 56-58 ºС pendant 1 heure avec une répétition de 5 à 7 fois après les heures 24. Dans les intervalles entre les chauffages, le matériau est maintenu à température ambiante. Les milieux nutritifs, pauvres en micro-organismes, et contenant également des substances facilement détruites et dénaturées à des températures supérieures à 60 ºС (protéines, vitamines) sont soumis à une tyndalisation. Ce sont du sérum sanguin, des œufs, etc. À la suite de la tyndalisation, la destruction complète des micro-organismes est obtenue.
Par des facteurs physiques et chimiques.
À facteurs physiques les stérilisations comprennent les hautes températures, les rayons ultraviolets, les rayonnements ionisants et les filtres bactériens.
Dans la pratique du laboratoire, la stérilisation à haute température est obtenue par calcination à la flamme, chauffage à la chaleur sèche, ébullition, traitement à la vapeur d'eau ou à la vapeur sous pression.
Riz. 1. Bec Bunsen. Riz. 2. Brûleur Teklu. Riz. 3. Répartition de la température dans la flamme du brûleur. 
Riz. 4. Armoire de séchage.
Riz. 5. Bains-marie : 1 - avec un apport d'eau constant ; 2 - cylindrique; 3 - à fond rond. Riz. 6. Stérilisateur à vapeur fluide.
La stérilisation à la flamme est une méthode simple et fiable pour le traitement de divers objets résistants à la chaleur : aiguilles, anses bactériennes, spatules microbiologiques, pipettes, lames et lamelles, pincettes, etc. brûleurs à gaz Systèmes Bunsen (Fig. 1) ou Teklu (Fig. 2). Le bec Bunsen est équipé d'un support mobile, par déplacement duquel il est possible de régler le débit d'air. Dans le brûleur Teklu, la quantité d'air fournie est réglée en déplaçant le disque (Fig. 2.1), la quantité de gaz - par la vis (Fig. 2, 2). En l'absence ou un accès insuffisant à l'air, une flamme fumeuse se forme. Le débit d'air vers le brûleur est ajusté jusqu'à l'obtention d'une flamme bleue. Une distribution approximative de la température dans la flamme du brûleur est illustrée à la Fig. 3.
La stérilisation à la chaleur sèche est réalisée dans une étuve (étuve Pasteur). Cette méthode ne stérilise que les articles secs - verrerie de laboratoire, etc. L'armoire de séchage (Fig. 4) est une petite armoire en fer à double paroi, entre laquelle se trouve un matériau d'isolation thermique(amiante, laine de verre). Les tubes à essai et les flacons proprement lavés sont scellés avec des bouchons en coton ; des pipettes, du coton, de la gaze sont enveloppés dans du papier et placés sur les étagères du meuble afin que les articles à stériliser ne touchent pas les parois chaudes de l'appareil et que l'air chauffé pénètre librement entre elles. La stérilisation dans une armoire de séchage dure 45 minutes - 1 heure à t° 160-170°.A des températures supérieures à 175°, le papier et le coton grillent.
L'ébullition dans l'eau détruit les formes non sporulées de microbes en 1 à 3 minutes. , aiguilles, couteaux, petits outils, etc. peuvent être bouillis dans des stérilisateurs métalliques et même dans une casserole ordinaire. L'ajout d'une petite quantité de bicarbonate de sodium (bicarbonate
Stérilisation- fournir; destruction dans tout matériel de micro-organismes pathogènes et non pathogènes sous forme végétative et de spores.
Préparation des ustensiles pour la stérilisation. Verrerie doit être proprement lavé et stérilisé. Pour le lavage, utilisez des solutions savonneuses ou chimiques détergents... Les nouvelles boîtes sont pré-bouillies dans une solution d'acide chlorhydrique à 1-2%, afin d'éviter le lessivage ultérieur du verre. La vaisselle lavée à l'eau courante est rincée à l'eau distillée et séchée.
Tubes à essai bactériologique. Les flacons coniques mats sont fermés par des bouchons en gaze de coton, constitués de rouleaux de coton étroitement torsadés, recouverts d'une couche de gaze. Pour les tubes à essais bactériologiques, des bouchons métalliques sous forme de capsules extérieures ont également été développés. Il convient de garder à l'esprit que la stérilisation des tampons de coton à haute température entraîne la libération de substances à partir du coton qui inhibent la croissance de certaines bactéries sensibles, telles que Brucella.
Lors de l'installation des pipettes, un coton-tige est inséré dans l'extrémité supérieure. Les pipettes Pasteur doivent avoir un capillaire scellé. Tous pipette de mesure enveloppé d'une longue bande de papier de 4 à 5 cm de large, en partant du bec, de manière hélicoïdale sur toute la longueur. Les pipettes Pasteur sont emballées dans du papier, 10 à 20 pièces chacune, des tubes à essai - 15 à 20 pièces chacune. Il est préférable de conserver tous les types de pipettes avant et après stérilisation dans des étuis métalliques spéciaux. Les bouchons des flacons sont en outre recouverts de capsules en papier.
Avant la stérilisation, les boîtes de Pétri propres et assemblées sont emballées dans du papier en 3 à 4 pièces. Après stérilisation, le papier protège les boîtes stériles de la contamination par la microflore.
Avant la stérilisation, la vaisselle est placée dans une armoire de séchage pas trop serrée pour assurer la circulation de l'air, et la température ne doit pas dépasser 180 ° C, car le papier et le coton se carboniseront à une température plus élevée. Après la fin de la stérilisation, le four n'est pas ouvert jusque-là. Jusqu'à ce que la température à l'intérieur tombe à 70-80 ° C, car une forte baisse de température peut entraîner la destruction du verre.
Si la vaisselle est destinée à y être stérilisée milieux nutritifs autoclave sous une pression d'au moins 1 atm., puis il n'est pas pré-stérilisé. Lors de la stérilisation de milieux avec de la vapeur fluide ou dans un autoclave sous une pression ne dépassant pas 0,5 atm. il est nécessaire d'utiliser des plats stériles.
Stérilisation à l'air sec chauffé. La méthode est utilisée pour stériliser la verrerie propre. Pour ce faire, utilisez un four Pasteur - une armoire de séchage spéciale à double paroi. À l'extérieur, il est doublé d'un matériau résistant à la chaleur. Il y a un thermomètre dans la partie supérieure. Un élément chauffant électrique automatique est placé entre le boîtier résistant à la chaleur et le boîtier métallique intérieur en bas. Lorsque l'armoire de séchage est raccordée au réseau électrique, l'air à l'intérieur s'échauffe. Lorsque la température de consigne est atteinte, l'heure de début de la stérilisation est notée. Mode de stérilisation: à une température de 155-160 ° C - exposition pendant 2 heures, à 165-170 ° C - 1-1,5 heures, à 180 ° C - 1 heure.Une fois le temps de stérilisation écoulé, le chauffage est arrêté.
Autoclavage. C'est la stérilisation à la vapeur sous pression en combinaison avec haute température dans un appareil spécial - un autoclave. Lorsque la vapeur saturée rencontre un objet plus froid, la vapeur se condense en eau, ce qui libère une grande quantité de chaleur. De plus, le volume de vapeur est réduit, ce qui facilite sa pénétration à l'intérieur du matériel à stériliser. Une condition préalable est la fourniture de vapeur vraiment saturée, de sorte que son contact avec un objet froid entraîne une condensation et un échauffement immédiats. L'industrie produit des autoclaves verticaux et horizontaux.
L'autoclave vertical est une chaudière métallique cylindrique à double paroi avec un couvercle hermétiquement fermé. Entre les murs, l'eau est versée jusqu'à un certain niveau par un robinet spécial avec un entonnoir. La paroi intérieure de la chaudière dans la partie supérieure est équipée de trous, dans la partie inférieure - avec un robinet à travers lequel, lorsque l'eau est chauffée, la vapeur chasse l'air de la chaudière. Un cadre de protection métallique est placé sur le dessus de l'autoclave, et il doit y avoir un espace libre entre celui-ci et l'autoclave lui-même. L'autoclave est chauffé en le branchant.
L'autoclave est chargé de matériel stérilisé, le couvercle est fermé et le robinet à travers lequel l'eau a été versée, le robinet inférieur est temporairement fermé ouvert. L'eau chauffée entre les parois de l'autoclave bout, la vapeur générée monte et passe à travers les ouvertures supérieures de la paroi intérieure dans la chaudière, déplaçant l'air par à-coups par le robinet ouvert inférieur. Lorsque tout l'air a été déplacé et que la vapeur commence à sortir en un flux régulier, le robinet du bas est fermé. En conséquence, la pression de vapeur à l'intérieur de l'autoclave augmente. Le début de la stérilisation est considéré comme le moment où la pression atteint une valeur prédéterminée (selon le manomètre). Le chauffage est régulé tout au long du processus de stérilisation, en maintenant la pression de la vapeur au même niveau. En cas d'augmentation excessive de la pression à l'intérieur de l'autoclave, une soupape de sécurité est prévue à travers laquelle l'excès de vapeur est automatiquement évacué vers l'extérieur.
Lorsque la pression de la vapeur augmente, la température dans l'autoclave augmente également.
Le manomètre affiche la pression de vapeur sans tenir compte de la pression atmosphérique ambiante (760 mmHg). Une fois le temps de stérilisation écoulé, l'autoclave est éteint. Après refroidissement à une lecture nulle du manomètre, ouvrir la vanne pour évacuer la vapeur.
L'autoclave horizontal diffère de construction verticale, mais le principe de fonctionnement est le même.
animal pathologique stérilisation virologique
Échantillons de formulaires remplis lors de l'envoi de matériel pathologique au laboratoire