Este un cilindru metalic cu pereți dubli acoperit cu o carcasă metalică la exterior. Este sigilat ermetic cu un capac masiv cu câteva șuruburi. Are un manometru cu supapă de siguranță și supapă de abur.
Înainte de sterilizare, apa distilată este turnată în autoclavă printr-o pâlnie cu un pahar de măsurare a apei până la linia indicată pe carcasă. Materialul pentru sterilizare este încărcat în camera de sterilizare, închis ermetic cu un capac, înșurubat și sursa de încălzire este pornită. În acest caz, supapa de evacuare a aburului este lăsată deschisă. Aburul generat în timpul fierberii trece între pereții autoclavului și intră în cameră prin orificiile din peretele interior. Când este încălzit, aerul iese mai întâi din autoclavă prin supapa de abur și apoi abur. Eliberarea unui flux continuu de abur uscat indică deplasarea completă a aerului din autoclavă: supapa este închisă, iar din acel moment presiunea în autoclavă începe să crească treptat, săgeata de pe manometru crește. Începutul sterilizării este momentul în care acul manometrului atinge presiunea necesară.
Fig. 3
Citirea manometrului corespunde unei anumite temperaturi a aburului în autoclavă: 0,50 MPa - 112 ° C, 0,1 MPa - 120, 0,15 MPa - 127, 0,2 MPa - 134 ° C.
Materialul dintr-o autoclavă este cel mai adesea sterilizat la 0,1 MPa timp de 20-30 de minute. La sfârșitul sterilizării, sursa de încălzire este oprită (săgeata manometrului ajunge treptat la zero). După aceea, supapa de evacuare a aburului este deschisă, restul aburului este eliberat. Apoi deșurubați cu grijă capacul și deschideți-l. După răcirea completă, scoateți materialul sterilizat.
Într-o autoclavă, puteți steriliza vase, instrumente, medii de cultură (cu excepția gelatinei și mediilor cu carbohidrați), pansamente etc. Când lucrați, trebuie să respectați regulile de siguranță. Persoanele care au certificat de drept de utilizare a autoclavului au voie să lucreze. Funcția de funcționare a autoclavei este verificată prin inspecția cazanului.
Aparatul lui Koch (Fig. 4) este un cilindru metalic învelit la exterior cu un material (linoleum, azbest) care nu conduce bine căldura. Se toarnă apă în partea de jos, iar materialul de sterilizare este așezat deasupra unui suport. Aparatul este închis cu un capac conic, care are deschideri pentru un termometru și evacuare a aburului. In partea de jos se afla un robinet pentru scurgerea apei. Sterilizarea se efectuează cu abur curgător la 100 ° C timp de 30-60 de minute. În acest mod, celulele vegetative ale microbilor care formează și nu formează spori mor. Sterilizarea fracționată (de trei ori) timp de 30-60 de minute timp de trei zile cu un interval de 18-20 de ore vă permite să creați condiții pentru germinarea sporilor în celulele vegetative și să scăpați de ei. În intervalele dintre sterilizare, sporii germinează și, la încălzirea ulterioară, mor. Aparatul Koch sterilizează acele materiale care nu pot rezista la temperaturi peste 100 ° C (gelatina, lapte, medii carbohidrate etc.).
Mediile proteice și serul de sânge care nu pot tolera o temperatură de 100 ° C sunt sterilizate fracționat la 56-58 ° C într-o baie de apă.
Dulap de uscare(Cuptorul Pasteur) (Fig. 5) este un dulap metalic cu pereți dubli, acoperit cu azbest deasupra. Peretele superior are deschideri pentru un termometru și ventilație. Aerul încălzit se ridică de jos între pereți și prin deschiderea superioară intră în dulap, unde materialul de sterilizat este așezat pe rafturi. Sterilizarea se efectuează cu căldură uscată la 150 "C timp de 2 ore, la 165-170 ° C timp de 45 de minute, la 180 ° C timp de 15 minute. Sticlăria se sterilizează într-un cuptor Pasteur. După sterilizare, dulapul este deconectat de la sursă de încălzire și deschisă numai după răcire.
Filtre bacteriene folosit pentru sterilizarea lichidelor fără încălzire. Acestea includ filtre (plăci) de azbest Chamberlain, Berkefeld și Seitz.
Lumânările cu filtru (Fig. 6) sunt cilindri goale din substanțe fin poroase: caolin cu un amestec nisip de cuarț(lumânări Chamberlain) și pământ infuzor (lumânări Berkefeld). Supozitoarele Chamberlain au pori de diferite dimensiuni prin care trec microbii. Lumânările care permit trecerea bacteriilor mari sunt desemnate prin literele L9, L1 (bis), L3, mediu - L5, L7, cel mai mic - L9, L11 , L13 Prin porozitate, dopurile Berkefeld sunt desemnate W, N, V(cei mai mari pori sunt in lumanari cu marca U).
Filtrele Seitz sunt plăci de azbest de diferite dimensiuni. La montarea dispozitivului pentru sterilizare, placa este așezată pe o grilă între discuri metalice (cu un orificiu în mijloc), care sunt presate strâns unele pe altele cu șuruburi. Filtrul montat se introduce printr-un dop într-un balon cu o ramură laterală (balon Bunsen) și un tub de cauciuc, învelit în hârtie și sterilizat într-o autoclavă la 120 ° C timp de 20-30 de minute.
Pentru a filtra materialul, se creează un vid în balonul Bunsen prin conectarea unui tub de cauciuc cu un ulei rarefiant. pompa manuala Komovsky sau o pompă electrică de vid.
Finalizarea lucrării. Microbii sunt cultivați în condiții optime conditii de temperatura... Pentru aceasta, laboratoarele folosesc termostate de aer sau apă.
(fig. 7) este un dulap metalic cu pereți dubli, între care se află un strat de apă sau aer. Partea exterioară a termostatului este acoperită cu un material care nu conduce bine căldura (azbest, linoleum).
Orez. 4, 5, 6.
În interiorul termostatului există rafturi pentru plasarea inoculului microorganismelor crescute. O temperatură constantă în termostat este menținută folosind un termostat, care este montat în capacul superior al termostatului. Dispozitivul termostat se bazează pe principiu expansiune liniară substante. Regulatoarele de temperatură sunt un aliaj din oricare două metale cu coeficienți diferiți de dilatare termică (alama, zinc) sau o „pernă” metalică umplută cu alcool, un amestec de alcool și eter, mercur sau alte substanțe care își modifică volumul la o anumită temperatură. Când termostatul se încălzește peste rata setată, metalele se extind, contactele se deschid și fluxul suplimentar de căldură este întârziat automat. După ce temperatura scade, se pornește electricitate iar fluxul de căldură este reluat.
1. Inflamatoare(din lat.flamma - flacără și fr.flamb é - ardere) - sterilizare prin aprinderea unor obiecte mici de metal sau sticlă în flacără. În acest fel se sterilizează bucle bacteriologice, pensete metalice, spatule și tuburi de sticlă, lamele de sticlă etc.. Temperatura flăcării este de aproximativ 1000 ° C. Când sunt aprinse, toate microorganismele (forme vegetative și de spori) ard. Este o metodă de sterilizare rapidă și fiabilă.
2. Fierbere... Este unul dintre cei mai moduri simple sterilizare. Se realizează într-un sterilizator - o cutie metalică dreptunghiulară cu un capac și o plasă în partea de jos pentru depozitarea articolelor de sterilizat. Se toarnă apă în el și se încălzește până la fierbere (încălzire electrică sau pe foc). Fierberea poate dura de la 15-30 de minute la 2 ore la o temperatură de aproximativ 100 ºС. Obiectele mici din metal sau sticlă sunt sterilizate - seringi, ace, tuburi de sticlă etc. În acest caz, formele vegetative ale microorganismelor și o parte din spori mor. De asemenea, practică opărirea materialului sterilizat cu apă clocotită.
3. Sterilizare la căldură uscată. Este produs cu aer cald într-un cuptor Pasteur sau dulap de uscare. Cuptorul Pasteur este un dulap cu pereți dubli căptușit cu azbest la exterior pentru izolare termică. In interiorul dulapului sunt rafturi metalice cu gauri pe care se aseaza materialul de sterilizat. Incalzire electrica. Sterilizarea se efectuează la o temperatură de 160-180 ºС în 1-2 ore de la atingerea acestor temperaturi (controlată de un termometru). Căldura uscată sterilizează în principal sticlărie - vase Petri, pipete, spatule (învelite în hârtie), precum și eprubete, baloane. Această tehnică este fiabilă - formele non-spori și spori ale microorganismelor mor. Materialul împachetat și sterilizat poate fi depozitat.
4. Sterilizarea cu abur curgător... Se realizează cu aer cald umed într-un aparat Koch. Aparatul (cazanul) lui Koch este un cilindru metalic, care poate fi pe picioare și acoperit cu linoleum. In aparat se toarna atat de multa apa incat sa nu ajunga pe marginea pe care este asezat un cerc metalic cu gauri si deasupra acestuia materialul sterilizat. Aparatul este închis ermetic cu un capac conic cu o gaură în mijloc pentru a ieși aburului și se încălzește pe foc. Când apa fierbe, vaporii de apă fierbinți cu o temperatură de aproximativ 100 ºС vor „curge” într-un curent puternic din orificiul din capac. Din acest moment se notează ora de începere a sterilizării. Sterilizarea cu abur curgător durează de la 45 de minute până la 1,5 ore, în funcție de volumul materialului sterilizat. Ele sterilizează mediile nutritive care nu pot fi încălzite peste 100 ºС, de exemplu, MPF (la temperaturi peste 100 ºС se lichefiază și nu se solidifică). Această metodă de sterilizare nu este complet de încredere - doar formele vegetative ale microorganismelor sunt complet ucise și sporii rămân. Pentru a obține o sterilizare completă a mediilor în aparatul Koch, este utilizată sterilizarea fracționată.
5. Sterilizare cu abur sub presiune (autoclavare). Se efectuează cu abur saturat într-o autoclavă. Autoclave sunt modele diferite... Autoclava verticală este un cazan masiv cu pereți dubli, înconjurat la exterior de o carcasă metalică, cu un capac greu cu balamale înșurubat strâns la cazan cu șuruburi. În partea inferioară a cazanului se află o pâlnie și un robinet prin care se toarnă apă în spațiul liber dintre cazanul interior și carcasă. Materialul de sterilizat se pune pe fundul cazanului, se înșurubează bine capacul, se pornește încălzirea electrică. Când apa începe să fiarbă, aburul curge în cazanul interior. Presiunea din autoclavă crește și temperatura crește în același timp. Când manometrul arată că presiunea din cazan a atins valoarea setată, notați ora de începere a sterilizării. Presiunea este menținută la un anumit nivel prin intermediul unei supape de siguranță.
De obicei, în practica de laborator, sterilizarea sub presiune se efectuează la 1,5-2 atm și o temperatură de aproximativ 115-120 ºС pentru
20-30 minute După ce a trecut timpul de sterilizare, încălzirea este oprită, supapa de abur este deschisă și aburul este eliberat. Mediile nutritive MPB, MPA, sticlăria cu apă sunt sterilizate cu abur sub presiune, pansament, instrumente chirurgicale etc. Autoclavarea este o metodă rapidă și fiabilă de sterilizare, care ucide toate formele de microorganisme, chiar și cei mai rezistenți spori.
6. Pasteurizare. Această tehnică de sterilizare parțială poartă numele savantului francez L. Pasteur care a propus-o. Metoda constă în faptul că lichidul turnat în vase sterile este încălzit într-o baie de apă la o temperatură de 60-90 ºС pentru
10-30 minute Este utilizat pentru mediile lichide care își modifică proprietățile fizico-chimice la temperaturi ridicate. Se pasteurizeaza laptele, smantana, vinul, berea, sucurile etc.. Se pastreaza vitaminele si gustul produselor. Produsele pasteurizate nu sunt supuse depozitării pe termen lung, deoarece cu această metodă de sterilizare mor doar formele vegetative ale microorganismelor, iar sporii rămân. În practica de laborator, această metodă este utilizată în principal pentru a separa speciile care formează spori de cele care nu formează spori.
7. Sterilizarea fracționată... Pe baza procesării materialului sterilizat în mai multe etape. Fracționat poate fi fiert sau sterilizat cu abur curgător într-un aparat Koch. De obicei, sterilizarea se efectuează timp de 3 zile timp de 30 de minute zilnic prin una dintre metodele indicate, iar în pauze se lasă mediul la temperatura camerei... Acest lucru se face pentru a provoca creșterea sporilor în forme vegetative și pentru a le distruge în timpul tratamentelor ulterioare, ceea ce crește fiabilitatea acestor metode.
8. Tindalizare. Acesta este un fel de sterilizare fracționată (pasteurizare fracționată). Recepția poartă numele savantului englez D. Tyndall, care a propus-o. Se efectuează într-o baie de apă la o temperatură de 56-58 ºС timp de 1 oră cu repetare de 5-7 ori după 24 de ore.În intervalele dintre încălzire, materialul este păstrat la temperatura camerei. Sunt supuse tindalizării mediile nutritive, sărace în microorganisme și, de asemenea, care conțin substanțe ușor distruse și denaturate la temperaturi peste 60 ºС (proteine, vitamine). Acestea sunt ser de sânge, ouă etc. Ca urmare a tindalizării, se realizează distrugerea completă a microorganismelor.
Prin factori fizici și chimici.
LA factori fizici sterilizările includ temperaturi ridicate, raze ultraviolete, radiații ionizante și filtre bacteriene.
În practica de laborator, sterilizarea la temperatură ridicată se realizează prin calcinare la flacără, încălzire cu căldură uscată, fierbere, prelucrare cu abur curgător sau abur sub presiune.
Orez. 1. Arzător Bunsen. Orez. 2. Arzator Teklu. Orez. 3. Distribuția temperaturii în flacăra arzătorului. 
Orez. 4. Dulap de uscare.
Orez. 5. Băi de apă: 1 - cu un flux constant de apă; 2 - cilindric; 3 - cu fundul rotund. Orez. 6. Sterilizator cu abur fluid.
Sterilizarea cu flacără este o metodă simplă și fiabilă de prelucrare a diferitelor obiecte rezistente la căldură: ace, bucle bacteriene, spatule microbiologice, pipete, lame și pahare de acoperire, pensete etc. arzatoare pe gaz Sisteme Bunsen (Fig. 1) sau Teklu (Fig. 2). Arzatorul Bunsen este prevazut cu un suport mobil, prin miscare se poate regla debitul de aer. În arzătorul Teklu, cantitatea de aer furnizată este reglată prin mișcarea discului (Fig. 2.1), cantitatea de gaz - prin șurub (Fig. 2, 2). În absența sau accesul inadecvat al aerului, se formează o flacără fumurie. Debitul de aer către arzător este reglat până când se obține o flacără albastră. O distribuție aproximativă a temperaturii în flacăra arzătorului este prezentată în Fig. 3.
Sterilizarea la căldură uscată se realizează într-un dulap de uscare (cuptor Pasteur). Această metodă sterilizează numai articole uscate - sticlărie de laborator, etc. Dulapul de uscare (Fig. 4) este un mic dulap de fier cu pereți dubli, între care se află un material termoizolant(azbest, vată de sticlă). Eprubetele și flacoanele spălate curat sunt sigilate cu dopuri din bumbac; pipetele, vata, tifonul sunt invelite in hartie si asezate pe rafturile dulapului astfel incat articolele de sterilizat sa nu atinga peretii fierbinti ai aparatului si aerul incalzit sa patrunda liber intre ele. Sterilizarea într-un dulap de uscare durează 45 de minute - 1 oră la t ° 160-170 °.La temperaturi peste 175 °, hârtia și vata se ard.
Fierberea în apă distruge formele non-spore de microbi în 1-3 minute. , ace, cuțite, unelte mici etc. pot fi fierte în sterilizatoare metalice și chiar într-o cratiță obișnuită. Adăugarea unei cantități mici de bicarbonat de sodiu (bicarbonat
Sterilizarea- aprovizionare; distrugerea în orice material a microorganismelor patogene și nepatogene în forme vegetative și de spori.
Pregatirea ustensilelor pentru sterilizare. Sticlărie trebuie spălate curat și sterilizate. Pentru spălare, utilizați soluții de săpun sau substanțe chimice detergenti... Vasele noi se fierb în prealabil într-o soluție de acid clorhidric 1-2%, pentru a evita scurgerea ulterioară a paharului. Vasele spălate în apă curentă se clătesc cu apă distilată și se usucă.
Eprubete bacteriologice. Baloanele conice, mate, se închid cu dopuri din tifon de bumbac, formate din suluri de vată bine răsucite, acoperite cu un strat de tifon. Pentru eprubete bacteriologice au fost dezvoltate și dopuri metalice sub formă de capace exterioare. Trebuie avut în vedere faptul că sterilizarea dopurilor de bumbac la temperaturi ridicate duce la eliberarea de substanțe din vată care inhibă creșterea unor bacterii sensibile, precum brucella.
La instalarea pipetelor, se introduce un tampon de bumbac în capătul superior. Pipetele Pasteur trebuie să aibă un capilar etanș. Fiecare pipeta de masurare se înfășoară cu o fâșie lungă de hârtie de 4-5 cm lățime, începând de la gura de scurgere, în mod elicoidal pe toată lungimea. Pipetele Pasteur sunt învelite în hârtie, câte 10-20 bucăți fiecare, eprubete - câte 15-20 bucăți fiecare. Este mai bine să depozitați toate tipurile de pipete înainte și după sterilizare în carcase metalice speciale. dopurile de pe baloane sunt acoperite suplimentar cu capace de hârtie.
Înainte de sterilizare, vasele Petri asamblate curate sunt împachetate în hârtie în 3 - 4 bucăți. După sterilizare, hârtia protejează vasele sterile de contaminarea cu microfloră.
Înainte de sterilizare, vasele sunt plasate într-un dulap de uscare nu prea strâns pentru a asigura circulația aerului, iar temperatura nu trebuie să depășească 180 ° C, deoarece hârtia și vata se vor carboniza la o temperatură mai ridicată. După terminarea sterilizării, cuptorul nu se deschide până atunci. Până când temperatura din el scade la 70-80 С, deoarece o scădere bruscă a temperaturii poate duce la distrugerea sticlei.
Dacă vasele sunt destinate a fi sterilizate în ele medii nutritive autoclavare la o presiune de cel puțin 1 atm., apoi nu este presterilizat. La sterilizarea mediilor cu abur fluid sau într-o autoclavă sub o presiune de cel mult 0,5 atm. este necesar să se folosească vase sterile.
Sterilizarea cu aer uscat încălzit. Metoda este folosită pentru sterilizarea sticlei curate. Pentru a face acest lucru, utilizați un cuptor Pasteur - un dulap special de uscare cu pereți dubli. La exterior, este căptușită cu material rezistent la căldură. Există un termometru în partea superioară. Un element de încălzire electric automat este plasat între carcasa rezistentă la căldură și carcasa interioară metalică în partea de jos. Când dulapul de uscare este conectat la rețeaua electrică, aerul din interiorul său se încălzește. Când temperatura setată este atinsă, se notează ora de începere a sterilizării. Mod de sterilizare: la o temperatură de 155-160 ° C - expunere timp de 2 ore, la 165-170 ° C - 1-1,5 ore, la 180 ° C - 1 oră. După ce a trecut timpul de sterilizare, încălzirea este oprită.
Autoclavare. Este sterilizarea cu abur sub presiune în combinație cu temperatura ridicataîntr-un aparat special - o autoclavă. Când aburul saturat întâlnește un obiect mai rece, aburul se condensează în apă, rezultând o cantitate mare de căldură eliberată. În plus, volumul de abur este redus, ceea ce facilitează pătrunderea acestuia în interiorul materialului de sterilizat. O condiție prealabilă este furnizarea de abur cu adevărat saturat, astfel încât contactul acestuia cu un obiect rece să conducă la condens și încălzire imediată. Industria produce autoclave verticale și orizontale.
Autoclava verticală este un cazan metalic cilindric cu pereți dubli, cu capac închis ermetic. Între pereți, apa este turnată la un anumit nivel printr-un robinet special cu o pâlnie. Peretele interior al cazanului în partea superioară este prevăzut cu orificii, în partea inferioară - cu un robinet prin care, atunci când apa este încălzită, aburul deplasează aerul din cazan. Un cadru de protecție metalic este pus deasupra autoclavei și trebuie să existe un spațiu liber între acesta și autoclavă în sine. Autoclavul este încălzit prin conectarea ei.
Autoclavul este încărcat cu material sterilizat, capacul este închis și robinetul prin care a fost turnată apă, robinetul inferior este închis temporar deschis. Apa încălzită dintre pereții autoclavei fierbe, aburul generat se ridică și trece prin deschiderile superioare ale peretelui interior în cazan, deplasând aerul în smucituri prin robinetul inferior deschis. Când tot aerul a fost deplasat și aburul începe să iasă într-un flux uniform, robinetul de jos este închis. Ca urmare, presiunea vaporilor din interiorul autoclavei crește. Începutul sterilizării este considerat momentul în care presiunea atinge o valoare prestabilită (conform manometrului). Încălzirea este reglată pe tot parcursul procesului de sterilizare, menținând presiunea aburului la același nivel. În cazul creșterii excesive a presiunii în interiorul autoclavei, este prevăzută o supapă de siguranță prin care excesul de abur este eliberat automat în exterior.
Pe măsură ce presiunea aburului crește, crește și temperatura din autoclavă.
Manometrul afișează presiunea vaporilor fără a ține cont de presiunea atmosferică ambientală (760 mmHg). După ce timpul de sterilizare a trecut, autoclavul este oprit. După ce s-a răcit la valoarea zero a manometrului, deschideți supapa pentru a evacua aburul.
Autoclavul orizontal diferă de construcție verticală, dar principiul de funcționare este același.
sterilizare virusologică animal patologic
Mostre de formulare completate la trimiterea materialului patologic la laborator