La chromatographie sur colonne est option la plus simple chromatographie d'adsorption... Il est utilisé pour séparer des mélanges de solides.
Un adsorbant solide tel que l'alumine (oxyde d'aluminium) est utilisé comme phase stationnaire, et un solvant est utilisé comme phase mobile. Une colonne de verre est d'abord remplie d'une suspension de ces deux phases. Un joint en laine de verre est placé au fond de la colonne pour empêcher la suspension de s'échapper (Fig. 6.41). Une fois la suspension épaisse déposée, le solvant est évacué de la colonne jusqu'à ce que son niveau soit juste au-dessus du niveau de la phase solide. Le mélange solide est ensuite dissous dans une petite quantité de solvant et la solution résultante est versée au sommet de la colonne. Une fois que la solution a traversé la colonne, plusieurs portions de solvant pur sont ajoutées à la colonne pour garantir que le niveau de solvant reste au-dessus du niveau de la phase stationnaire. Le processus de passage d'un solvant à travers une colonne est appelé élution. Le solvant utilisé pour l'élution est appelé éluant. La séparation des divers composants du mélange se produit au fur et à mesure qu'il se déplace le long de la colonne. Si les composants du mélange sont colorés, tels que des pigments ou des colorants, leur séparation peut être observée visuellement. En figue. 6.42 montre comment se produit la séparation d'un mélange à deux composants. Le composant 1 a un coefficient de partage plus élevé et traverse donc la colonne plus rapidement. Le temps qu'il faut pour qu'un composant du mélange traverse la colonne est appelé temps d'élution de ce composant. Des portions consécutives des composants élués sont recueillies dans des flacons ou des tubes à essai. Le solvant peut être éliminé par distillation, ce qui donne un composant pur. En figue. 6.42 montre un cas idéalisé de séparation complète de deux composants.
Il utilise des colonnes étroites, une pression de buse élevée et un temps de réponse du détecteur très rapide. À cause de haute pression les pics quittent la colonne très rapidement, et des détecteurs rapides sont capables de suivre le signal de ces pics très étroits. La séparation est maintenue car un capillaire d'un diamètre intérieur de 0,1 mm est utilisé. Une productivité accrue du laboratoire est à votre avantage, et une plus grande reproductibilité se traduit par des analyses plus précises. Des économies de gaz importantes sont également réalisées, le débit étant corrélé au temps d'injection.
Chromatographie sur couche mince
La chromatographie sur couche mince (TCX) est une forme de chromatographie d'adsorption. Il est largement utilisé en chimie organique pour identifier des composés et établir leur pureté. Le gel de silice, l'alumine ou la cellulose contenant un liant tel que l'amidon est habituellement utilisé comme phase d'adsorption solide.
De plus, l'expression de l'expression développementale dépend de l'environnement car elle fournit un « contexte » ou un « réseau » dans lequel les nouveaux produits géniques doivent opérer. Ce « contexte » comprend les tensions chimiques, électriques et structurelles ou mécaniques, ainsi que les structures cellulaires et organelles. Les champignons filamenteux devraient être uniques en ce qu'ils offrent, dans le cadre du schéma de croissance normal d'un seul organisme, la capacité d'étudier le comportement de cellules indépendantes en croissance végétative et le comportement des cellules qui contribuent à la structure et au développement d'un complexe d'organes. et tissus.
Riz. 6.41. Chromatographie sur colonne. Riz. 6.43. Chromatographie sur couche mince (CCM).
Une suspension d'un tel solide est répartie finement et uniformément sur la surface de la plaque de verre et laissée à sécher. Près d'une extrémité de la plaque, un point de la solution d'essai est appliqué sur la couche adsorbante. Pour faciliter l'identification des composants, des composés connus peuvent également être repérés à côté de ce point. Une fois que les taches sur l'extrémité de la plaque ont séché, la plaque est plongée avec cette extrémité dans une petite quantité de solvant versée dans un verre ou un réservoir (Fig.6.43), qui est ensuite recouvert d'un couvercle pour empêcher l'évaporation du solvant. . Le solvant monte lentement sur la plaque par capillarité. Lorsque le front de solvant passe les taches, les substances qui y sont dissoutes commencent à se déplacer. La vitesse de leur déplacement dépend de leurs coefficients de distribution. Lorsque l'avant du solvant monte jusqu'au bord supérieur de la plaque, il est retiré du verre et séché. Les différents composants du mélange coloré peuvent être identifiés visuellement. Si les composants du mélange n'ont pas de couleur, la plaque doit être développée. Le développement de la plaque est obtenu en la pulvérisant avec n'importe quel réactif colorant, en l'irradiation avec de la lumière ultraviolette, en la chauffant ou en la maintenant dans une atmosphère de n'importe quel gaz, par exemple de la vapeur d'iode. Chaque composant du mélange peut être caractérisé par un facteur de rétention spécifique Rf. Le coefficient de rétention Rf est lié au coefficient de répartition de ce composant et est déterminé par le rapport
Une compréhension préliminaire essentielle de la façon dont ces événements peuvent être contrôlés est l'évaluation de la nature des « cellules » dans les champignons filamenteux. Une cellule microbienne libre montre une grande flexibilité et adaptabilité en réponse à son environnement, mais le contact avec environnement si proche que le concept de comportement cellulaire n'a de sens que pour l'ensemble du système de l'environnement cellulaire. Ce n'est pas le cas pour les cellules tissulaires, où l'organisation et le métabolisme des cellules qui composent le tissu peuvent déterminer en grande partie l'environnement des cellules individuelles.
Cependant, la contribution au tissu doit être considérée comme un transfert avec lui d'une certaine perte de liberté de réponse - une diminution de la flexibilité et de l'adaptabilité que peut posséder une cellule individuelle - au profit des actions coordonnées nécessaires pour le tissu dans son ensemble .Dans la plupart des organismes, le comportement des cellules indépendantes ne peut être étudié que dans les conditions artificielles en examinant des cultures cellulaires. Pour les champignons, la croissance végétative de cellules « indifférenciées » sous forme de mycélium est une partie normale du cycle de vie.
Rf = (Distance de mouvement du composant depuis le point d'origine) / (Distance de mouvement du solvant depuis le point d'origine)
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Colonnes chromatographiques en acier inoxydable : colonne de séparation de 100 mm de long, de concentration de 50 mm de long, colonne préliminaire de 50 mm de long, colonne d'étranglement de 50 mm de long, colonne de suppression de 200 mm de long (2 pcs.
Néanmoins, le même mycélium peut conduire à la formation de corps fertiles de structure aussi complexe et d'apparence aussi massive que les organes et tissus d'organismes supérieurs. Cette unicité s'accompagne cependant de quelques difficultés. L'un d'eux se produit déjà avec l'utilisation du mot "cellule" dans les paragraphes ci-dessus. L'hyphe fongique est un filament composé de nombreuses branches reliées les unes aux autres jusqu'à la fin, mais la croissance des hyphes est si fortement polarisée que la véritable croissance de la croissance est absolument limitée par la pointe hyphamique, donc toute la morphologie de l'hyphe dépend de la événements qui se déroulent à son apogée.
| Séparation de substances polaires utilisant le polytétrafluoroéthylène comme support solide (Stashchevsky et Yanak, 1962. | Dépendance de la hauteur de la plaque théorique sur le débit du gaz vecteur pour le sterhamol et le téflon (Stashevsky et Yanak, 1962. |
Colonne chromatographique - 20% squalane sur sterhamol (), sur Teflon-6 de Du Pont (O) - Substance analysée - hexane.
Les colonnes chromatographiques doivent être préparées de telle sorte que l'échange entre les phases mobile et stationnaire se produise assez fréquemment et assez rapidement. Ces exigences sont vraies pour les colonnes remplies et capillaires. Ils sont mieux exécutés lorsque les deux phases ont une épaisseur de couche mince et une grande interface totale. Dans les colonnes garnies, cette exigence est satisfaite par une surface à pores grossiers d'un support solide à grains fins ou d'un adsorbant. Dans les colonnes capillaires, ceci est obtenu par la formation d'un film uniformément mince, fermement maintenu et stable de la phase stationnaire correspondante sur les parois internes.
Les hyphes fongiques sont aussi variables d'une espèce à l'autre que tout autre aspect de la biologie fongique, mais de manière générale, un filament hyphe, divisé en compartiments par des parois transversales, a un compartiment apical qui fait peut-être jusqu'à dix fois la longueur d'un compartiment subterminal ou intercalaire. Les cloisons primaires fongiques sont formées, toujours perpendiculairement au grand axe des hyphes, par un processus de constriction dans lequel un ruban périphérique de microfibres interagit avec des microbulles et d'autres organites cellulaires membranaires.
Les cloisons qui divisent les hyphes en compartiments peuvent être pleines ou perforées par un grand pore central. La forme septale peut être modifiée par des cellules hyphamiques de chaque côté du septum et peut varier en fonction de l'âge, de la position dans le mycélium ou de la position dans les tissus de la structure différenciée. Il s'agit d'un septum hyphe ouvert, qui nous pose un problème philosophique : si la cellule est un récipient fermé, le septum fongique divisera-t-il les hyphes en cellules, dont chacune connaît une existence individuelle, ou le septum fongique divisera-t-il les hyphes en simples morceaux qui partagent l'expérience cohérente de l'hyphe entière ?
Une colonne chromatographique de 8 l de long avec du polyéthylène glycol 200 déposé à partir d'une solution à 0,5% à une température de 20 a une efficacité de séparation correspondant à 1500 plateaux théoriques pour 1 m de longueur. Un capillaire non modifié dans exactement les mêmes conditions avait 150 à 300 tubes théoriques. Qu'il y ait un film continu dans de telles colonnes capillaires, comme dans les colonnes de Goleev, ou si la phase stationnaire est répartie sur une surface dispersée n'est pas encore établi avec précision.
L'hyphe est subdivisé en cellules discrètes, dont chacune connaît une existence individuelle, contrôlant les échanges à travers les septa hyphes avec le même degré de complexité qu'une cellule distincte indépendante appartenant à l'un des règnes eucaryotes contrôle ses échanges avec le monde extérieur. Le caractère multicellulaire de l'hyphe fongique filamenteux ne peut être remis en cause, du moins dans la mesure où il est divisé en compartiments dont les interactions sont soigneusement régulées et qui peuvent présenter des schémas de différenciation contrastés ; en effet, la formation générique de l'hyphe septé peut être interprétée comme une origine évolutive profonde du multicellulaire.
La colonne chromatographique est réalisée sous la forme d'une spirale constituée d'un tube en acier inoxydable ou en laiton de 2 m de long et d'un diamètre interne de G mm.
La colonne chromatographique est la partie centrale, principalement la partie principale du système chromatographique. Sous une forme abstraite, la colonne peut être représentée comme un lit cylindrique d'une phase stationnaire interagissant dans le processus de séparation chromatographique avec une phase mobile et du sorbate dissous dans celle-ci. Les molécules de sorbate migrent à travers la colonne lorsqu'elles sont en phase mobile et restent en place lorsqu'elles sont en phase stationnaire. Plus l'affinité du sorbate pour la phase stationnaire est grande et moins pour la phase mobile, plus il se déplace lentement le long de la colonne et plus il y est retenu longtemps. En raison de la différence d'affinité des composants du mélange pour les phases stationnaire et mobile, l'objectif principal de la chromatographie est atteint, la séparation du mélange en zones de concentration séparées (pics) des composants lorsqu'ils se déplacent le long de la colonne avec la phase mobile sur une période de temps acceptable.
De plus, chez les champignons filamenteux, la formation de branches hyphales est le seul moyen d'augmenter le nombre de points de croissance, ce qui signifie que chez les champignons filamenteux, la ramification hyphale est l'équivalent de la division cellulaire chez les animaux et les plantes. Les analyses cinétiques montrent clairement que la croissance fongique filamenteuse peut être interprétée sur la base d'un cycle cellulaire régulier. Ainsi, les champignons filamenteux doivent être considérés comme des organismes cellulaires qui produisent des tissus différenciés constitués de communautés cellulaires spécialisées qui sont la progéniture de la cellule d'origine ou de la population cellulaire induite à commencer la différenciation.
| Schéma du chromatographe en phase gazeuse à haute température. |
La colonne chromatographique est un tube en acier inoxydable de 70 cm de long avec un diamètre extérieur de 9 5 mm, garni de briques réfractaires(granulométrie 20-40 mesh), qui a été préalablement lavée à l'eau et séchée. Après remplissage (avec agitation continue), la colonne a été pliée en une spirale.
La colonne chromatographique a été construite à partir de sections de tubes cylindriques reliés par des brides.
Cependant, les champignons produisent des structures extrêmement complexes et leurs recherches peuvent grandement contribuer à notre compréhension des processus de développement. L'analyse des processus de différenciation cellulaire et de formation d'images peut révéler des stratégies générales et des voies conservatrices, ainsi que des mécanismes alternatifs.
Dans un sens plus pratique, de nombreux agents pathogènes fongiques utilisent des structures multicellulaires dans leurs stratégies d'infection et de survie, tandis que la valeur commerciale des champignons cultivés semble dépendre de leur capacité morphogénétique ; comprendre l'architecture et la conception des structures multicellulaires peut conduire à de meilleures techniques de gestion et d'élagage. Les plantes, les animaux et les champignons sont maintenant considérés comme trois règnes complètement différents d'organismes eucaryotes, qui doivent s'être séparés dans l'évolution à un certain niveau bien avant la création de la catégorie d'organisation multicellulaire.
| Schéma de séparation chromatographique avec contrôle de la radioactivité. - colonne chromatographique. Comptoir 2 faces. Cellule à 3 flux. 4 - installation de comptage. Échantillon de 5 tasses. 6 - parois de la protection en plomb du compteur final. (Le haut de la figure montre une vue de dessus de la Flow Cell. |
Colonne chromatographique (avec une hauteur de couche échangeuse de cations de 25 à 30 cm), passant dans une cellule à écoulement. Une solution contenant 0 02 - 0 1 mg d'équivalent de sels de cobalt et de fer contenant Co60 et Fe59 (activité égale à 105 imp.
Colonne de chromatographie passant sur la Flow Cell II.
La colonne chromatographique est un tube en verre de type burette de 30 cm de long et 1 cm de diamètre.Une rallonge de 3 cm de long et 2 cm de diamètre est réalisée dans la partie supérieure du tube, qui est un entonnoir étroit pour le remplissage de la colonne avec une solution.
Les parallèles entre la morphogenèse fongique et d'autres organismes eucaryotes sont remarquables afin que nous puissions utiliser le cadre conceptuel qui a déjà été établi dans l'espoir de modèles de développement qui pourraient stimuler de nouvelles expériences avec du matériel fongique. Lorsque cela est fait et compte tenu des particularités inhérentes aux aspects uniques de l'organisation structurelle des champignons, des similitudes surprenantes dans l'organisation de la morphogenèse apparaissent entre les champignons, les plantes et les animaux. Qu'il doit y avoir des différences entre les phénomènes de développement chez les champignons, les plantes et les animaux n'est pas une grande surprise ; qu'il y ait une ressemblance aussi profonde qu'il y paraît n'est pas étonnant.
Colonne chromatographique - accueil composant, dans lequel la séparation réelle des composants du mélange est réalisée. La colonne peut être constituée de tubes droits, coudés ou enroulés en cuivre, aluminium, verre ou acier inoxydable. La fabrication de colonnes en cuivre doit être limitée, car ce métal adsorbe ou réagit fortement avec l'ammoniac, les acétylènes, etc. Le succès de la GC dépend du choix de la colonne. Pour assurer un emballage uniforme, les tubes sont d'abord remplis d'un support solide inerte, sur lequel un liquide non volatil est appliqué sous la forme d'un film mince, puis torsadés en une spirale pour augmenter la longueur des colonnes. Les colonnes capillaires sont des tubes creux de petit diamètre avec un mince film liquide appliqué sur leurs parois. Les haut-parleurs droits sont les plus efficaces, mais lorsque vous travaillez dans la zone hautes températures ils causent quelques difficultés. Lors de la torsion du tube en spirale, le diamètre de la spirale doit être dix fois plus grand diamètre tube. Cette condition est nécessaire pour réduire l'influence de la diffusion et de l'effet de paroi.
Il ne fait aucun doute que dans les trois groupes, la multicellularité a évolué bien avant que les trois lignées évolutives ne divergent vers leurs formes caractéristiques et complètement distinctes de forme, de structure et de comportement. Ainsi, peu ou pas d'organisations qui permettent la morphogenèse multicellulaire peuvent être dotées d'un ancêtre commun. Les parallèles qui semblent exister dans la régulation de base de la morphogenèse chez les plantes, les animaux et les champignons suggèrent une évolution convergente ; mais, encore plus intéressant, et peut-être plus intéressant, il est implicite qu'il n'y a que ce nombre limité de façons de résoudre les problèmes associés à l'organisation des populations cellulaires dans certains modèles, quelle que soit la nature de ces cellules.