Ini adalah silinder logam berdinding ganda yang bagian luarnya ditutupi dengan selubung logam. Itu tertutup rapat dengan penutup besar menggunakan beberapa sekrup. Dilengkapi dengan pengukur tekanan dengan katup pengaman dan katup uap.
Sebelum sterilisasi, air suling dituangkan ke dalam autoklaf melalui corong dengan gelas takar air sampai garis yang tertera pada wadah. Bahan untuk sterilisasi dimasukkan ke dalam ruang sterilisasi, ditutup rapat dengan penutup, disekrup dan sumber pemanas dihidupkan. Dalam hal ini, katup uap dibiarkan terbuka. Uap yang dihasilkan selama perebusan melewati antara dinding autoklaf dan masuk ke dalam ruangan melalui lubang di dinding bagian dalam. Saat dipanaskan, udara pertama-tama keluar dari autoklaf melalui katup uap, lalu uap. Pelepasan aliran uap kering yang terus menerus menunjukkan perpindahan udara sepenuhnya dari autoklaf: keran ditutup, dan sejak saat itu tekanan dalam autoklaf mulai meningkat secara bertahap, jarum pada pengukur tekanan naik. Awal sterilisasi dianggap saat jarum pengukur tekanan mencapai tekanan yang diinginkan.
Gambar.3
Pembacaan pengukur tekanan sesuai dengan suhu uap tertentu dalam autoklaf: 0,50 MPa - 112 °C, 0,1 MPa - 120, 0,15 MPa - 127, 0,2 MPa - 134 °C.
Bahan dalam autoklaf paling sering disterilkan pada 0,1 MPa selama 20-30 menit. Di akhir sterilisasi, matikan sumber pemanas (jarum pengukur tekanan secara bertahap mencapai nol). Setelah ini, buka katup uap dan keluarkan sisa uap. Kemudian dengan hati-hati buka tutupnya dan buka. Setelah benar-benar dingin, keluarkan bahan yang telah disterilkan.
Autoklaf dapat digunakan untuk mensterilkan piring, peralatan, media kultur (kecuali agar-agar dan media yang mengandung karbohidrat), dressing, dll. Saat bekerja, aturan keselamatan harus dipatuhi. Orang yang memiliki sertifikat hak penggunaan autoklaf diperbolehkan bekerja. Kemudahan servis autoklaf diperiksa oleh inspektorat ketel uap.
Peralatan Koch (Gbr. 4) adalah silinder logam yang bagian luarnya dilapisi dengan bahan (linoleum, asbes) yang tidak menghantarkan panas dengan baik. Air dituangkan ke bagian bawah dan bahan sterilisasi ditempatkan di atas dudukan. Perangkat ditutup dengan penutup berbentuk kerucut, yang memiliki lubang untuk termometer dan saluran keluar uap. Di bagian bawah terdapat keran untuk mengalirkan air. Sterilisasi dilakukan dengan uap yang mengalir pada suhu 100°C selama 30-60 menit. Dalam mode ini, sel-sel vegetatif mikroba pembentuk spora dan non-pembentuk spora mati. Sterilisasi fraksional (tiga kali) selama 30-60 menit selama tiga hari dengan interval 18-20 jam memungkinkan Anda menciptakan kondisi untuk perkecambahan spora ke dalam sel vegetatif dan membuangnya. Dalam interval waktu antara sterilisasi, spora berkecambah dan mati selama pemanasan berikutnya. Peralatan Koch mensterilkan bahan-bahan yang tidak tahan suhu di atas 100 °C (agar-agar, susu, media karbohidrat, dll.).
Media protein dan serum darah yang tidak tahan suhu 100 °C disterilkan secara fraksional pada suhu 56-58 °C dalam penangas air.
Lemari pengering(Oven Pasteur) (Gbr. 5) adalah lemari logam berdinding ganda yang dilapisi asbes di atasnya. Dinding atas memiliki lubang untuk termometer dan ventilasi. Udara panas naik dari bawah di antara dinding dan melalui bukaan atas masuk ke lemari, tempat bahan yang akan disterilkan diletakkan di rak. Sterilisasi dilakukan dengan panas kering suhu 150°C selama 2 jam, suhu 165-170°C - 45 menit, suhu 180°C - 15 menit. Peralatan gelas disterilkan dalam oven Pasteur. Setelah sterilisasi, kabinet dilepas dari oven. sumber pemanas dan dibuka hanya setelah pendinginan sempurna.
Filter bakteri digunakan untuk mensterilkan cairan tanpa pemanasan. Ini termasuk Chamberlant, lilin Berkefeld dan filter asbes Seitz (pelat).
Filter lilin (Gbr. 6) adalah silinder berongga yang terbuat dari bahan berpori halus: kaolin dengan campuran pasir kuarsa(Lilin Chamberlant) dan tanah infusorial (Lilin Berkefeld). Lilin chamberlant memiliki pori-pori dengan ukuran berbeda-beda yang dilalui mikroba. Lilin yang dapat dilewati bakteri besar ditandai dengan huruf L9, L1(bis), L3, sedang - L5, L7, terkecil - L9, L11 , L13 Lilin Berkefeld ditentukan berdasarkan porositas W, N, V(lilin merk U mempunyai pori-pori paling besar).
Filter Seitz adalah pelat asbes dengan berbagai ukuran. Saat memasang perangkat untuk sterilisasi, pelat ditempatkan pada jaring di antara cakram logam (dengan lubang di tengah), yang ditekan erat dengan sekrup. Filter yang sudah terpasang dimasukkan melalui sumbat ke dalam labu dengan saluran keluar samping (labu Bunsen) dan tabung karet, dibungkus kertas dan disterilkan dalam autoklaf pada suhu 120 °C selama 20-30 menit.
Untuk menyaring bahan, buatlah ruang hampa di dalam labu Bunsen dengan menyambungkan tabung karet yang berisi minyak yang telah dijernihkan ke dalamnya. pompa tangan Komovsky atau pompa vakum listrik.
Penyelesaian pekerjaan. Mikroba dibudidayakan secara optimal kondisi suhu. Untuk tujuan ini, laboratorium menggunakan termostat udara atau air.
(Gbr. 7) adalah lemari logam dengan dinding ganda, di antaranya terdapat lapisan air atau udara. Bagian luar termostat dilapisi dengan bahan yang menghantarkan panas dengan buruk (asbes, linoleum).
Beras. 4, 5, 6.
Di dalam termostat terdapat rak untuk menempatkan benih mikroorganisme yang tumbuh. Suhu konstan dalam termostat dipertahankan menggunakan termostat, yang terpasang pada penutup atas termostat. Perangkat termostat didasarkan pada prinsip ekspansi linier zat. Termoregulasi adalah paduan dua logam dengan koefisien muai panas berbeda (kuningan, seng) atau “bantalan” logam yang diisi dengan alkohol, campuran alkohol dan eter, merkuri atau zat lain yang mengubah volumenya pada suhu tertentu. Ketika termostat memanas di atas norma yang ditetapkan, logam memuai, kontak terbuka dan aliran panas lebih lanjut secara otomatis tertunda. Setelah suhu turun, lampu menyala listrik dan aliran panas berlanjut.
1. menyala(dari lat. flamma - api dan fr. flamb é - bakar) - sterilisasi dengan mengapur benda logam atau kaca kecil dalam nyala api. Dengan cara ini, loop bakteriologis, pinset logam, spatula dan tabung kaca, slide kaca, dll disterilkan dengan suhu nyala sekitar 1000ºC. Ketika dikalsinasi, semua mikroorganisme (bentuk vegetatif dan spora) terbakar. Ini adalah metode sterilisasi yang cepat dan andal.
2. Mendidih. Merupakan salah satu yang paling banyak cara sederhana sterilisasi. Ini dilakukan dalam alat sterilisasi - kotak logam persegi panjang dengan penutup dan jaring di bagian bawah untuk menempatkan barang-barang yang disterilkan. Tuang air ke dalamnya dan panaskan hingga mendidih (pemanas listrik atau di atas api). Perebusan dapat berlangsung dari 15-30 menit hingga 2 jam pada suhu sekitar 100 ºС. Sterilkan benda logam atau kaca kecil - jarum suntik, jarum suntik, tabung kaca, dll. Dalam hal ini, mikroorganisme bentuk vegetatif dan beberapa spora mati. Dipraktekkan juga untuk melepuh bahan yang disterilkan dengan air mendidih.
3. Sterilisasi panas kering. Diproduksi dengan udara panas dalam oven atau oven Pasteur. Oven Pasteur adalah kabinet berdinding ganda yang dilapisi asbes di bagian luar untuk insulasi termal. Di dalam lemari terdapat rak logam berlubang untuk meletakkan bahan yang akan disterilkan. Pemanas listrik. Sterilisasi dilakukan pada suhu 160-180 ºС selama 1-2 jam sejak tercapai suhu tersebut (dikontrol dengan termometer). Panas kering terutama digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas - cawan Petri, pipet, spatula (dibungkus kertas), serta tabung reaksi dan labu. Teknik ini dapat diandalkan - mikroorganisme non-spora dan spora mati. Dibungkus kertas dan disterilkan, bahannya bisa disimpan.
4. Sterilisasi uap mengalir. Itu dilakukan dengan udara lembab panas di peralatan Koch. Peralatan Koch (boiler) adalah silinder logam, yang dapat berkaki dan ditutup dengan linoleum. Air secukupnya dituangkan ke dalam alat sehingga tidak mencapai langkan, di atasnya ditempatkan lingkaran logam berlubang dan bahan yang akan disterilkan diletakkan di atasnya. Alat ditutup rapat dengan tutup berbentuk kerucut yang diberi lubang di tengahnya agar uap dapat keluar dan dipanaskan di atas api. Saat air mendidih, uap air panas dengan suhu sekitar 100 ºС akan “mengalir” dalam aliran deras dari lubang di tutupnya. Mulai saat ini, waktu mulai sterilisasi dicatat. Sterilisasi dengan uap yang mengalir berlangsung antara 45 menit hingga 1,5 jam, tergantung volume bahan yang akan disterilkan. Mensterilkan media nutrisi yang tidak dapat dipanaskan di atas 100 ºС, misalnya MPG (pada suhu di atas 100 ºС mencair dan tidak mengeras). Metode sterilisasi ini tidak sepenuhnya dapat diandalkan - hanya mikroorganisme bentuk vegetatif yang terbunuh sepenuhnya, tetapi spora tetap terjaga. Untuk mencapai sterilisasi media yang lengkap dalam peralatan Koch, digunakan sterilisasi fraksional.
5. Sterilisasi uap di bawah tekanan (autoklaf). Itu dilakukan dengan uap air jenuh dalam autoklaf. Ada autoklaf desain yang berbeda. Autoklaf vertikal adalah ketel besar berdinding ganda, bagian luarnya dikelilingi oleh selubung logam, dengan penutup berengsel berat yang dibaut erat ke ketel. Di bagian bawah ketel terdapat corong dan keran yang melaluinya air dialirkan ke ruang kosong antara ketel bagian dalam dan selubung. Bahan yang akan disterilkan diletakkan di dasar ketel, tutupnya disekrup rapat, dan pemanas listrik dinyalakan. Saat air mendidih, uap masuk ke dalam ketel bagian dalam. Tekanan dalam autoklaf meningkat, dan pada saat yang sama suhu meningkat. Bila pengukur tekanan menunjukkan bahwa tekanan dalam ketel telah mencapai nilai yang ditentukan, tandai waktu mulai sterilisasi. Tekanan dipertahankan pada tingkat tertentu dengan menggunakan katup pengaman.
Biasanya dalam praktek laboratorium, sterilisasi tekanan dilakukan pada 1,5-2 atm dan suhu sekitar 115-120 ºС untuk
20-30 menit. Setelah waktu sterilisasi habis, pemanasan dihentikan, katup uap dibuka dan uap dikeluarkan. Media nutrisi MPB, MPA, peralatan gelas dengan air disterilkan dengan uap bertekanan. berpakaian, peralatan bedah dll. Autoklaf adalah metode sterilisasi yang cepat dan andal, yang membunuh semua bentuk mikroorganisme, bahkan spora yang paling resisten sekalipun.
6. Pasteurisasi. Metode sterilisasi parsial ini dinamai ilmuwan Perancis L. Pasteur yang mengusulkannya. Caranya, cairan yang dituangkan ke dalam wadah steril dipanaskan dalam penangas air dengan suhu 60-90 ºС selama
10-30 menit. Ini digunakan untuk media cair yang mengubah sifat fisik dan kimianya pada suhu tinggi. Mereka mempasteurisasi susu, krim, anggur, bir, jus, dll. Pada saat yang sama, vitamin dan rasa produk tetap terjaga. Produk yang dipasteurisasi tidak dapat disimpan dalam jangka waktu lama, karena dengan metode sterilisasi ini hanya mikroorganisme bentuk vegetatif yang mati, sedangkan spora tetap ada. Dalam praktik laboratorium, metode ini digunakan terutama untuk memisahkan spesies pembentuk spora dari spesies yang tidak membentuk spora.
7. Sterilisasi fraksional. Hal ini didasarkan pada pengolahan bahan yang akan disterilkan dalam beberapa tahap. Pecahan dapat berupa perebusan atau sterilisasi dengan uap yang mengalir dalam alat Koch. Biasanya sterilisasi dilakukan selama 3 hari selama 30 menit setiap hari dengan menggunakan salah satu metode yang ditunjukkan, dan saat istirahat media dibiarkan pada suhu yang sama. suhu kamar. Hal ini dilakukan untuk memicu pertumbuhan spora menjadi bentuk vegetatif dan kehancurannya selama perawatan selanjutnya, sehingga meningkatkan keandalan teknik ini.
8. Tyndalisasi. Ini adalah jenis sterilisasi fraksional (fractional pasteurization). Teknik ini dinamai ilmuwan Inggris D. Tyndall yang mengusulkannya. Dilakukan dalam penangas air pada suhu 56-58 ºС selama 1 jam, diulangi 5-7 kali setiap 24 jam.Dalam selang waktu pemanasan, bahan disimpan pada suhu kamar. Tyndallisasi dilakukan pada media nutrisi yang miskin mikroorganisme dan juga mengandung zat yang mudah hancur dan terdenaturasi pada suhu di atas 60 ºC (protein, vitamin). Ini adalah serum darah, telur, dll. Sebagai hasil dari tyndalisasi, penghancuran total mikroorganisme tercapai.
Menggunakan faktor fisik dan kimia.
KE faktor fisik Sterilisasi meliputi suhu tinggi, sinar ultraviolet, radiasi pengion, dan filter bakteri.
Dalam praktek laboratorium, sterilisasi dengan suhu tinggi dilakukan dengan kalsinasi dalam nyala api, pemanasan dengan panas kering, perebusan, pengolahan dengan uap mengalir atau uap bertekanan.
Beras. 1. Pembakar bunsen. Beras. 2. Pembakar teklu. Beras. 3. Distribusi suhu pada nyala api burner. 
Beras. 4. Lemari pengering.
Beras. 5. Pemandian air: 1 - dengan aliran air yang konstan; 2 - silinder; 3 - bagian bawah bulat. Beras. 6. Alat sterilisasi uap mengalir.
Sterilisasi api adalah metode sederhana dan andal untuk memproses berbagai benda tahan panas: jarum, simpul bakteri, spatula mikrobiologi, pipet, slide dan kaca penutup, pinset, dll. pembakar gas Bunsen (Gbr. 1) atau sistem Teklu (Gbr. 2). Pembakar Bunsen dilengkapi dengan dudukan yang dapat digerakkan, dengan menggerakkannya Anda dapat mengatur akses udara. Pada burner Teklu, jumlah udara yang masuk diatur dengan menggerakkan piringan (Gbr. 2,1), jumlah gas diatur dengan sekrup (Gbr. 2, 2). Jika akses udara tidak ada atau tidak mencukupi, nyala api berasap akan terbentuk. Pasokan udara ke burner diatur hingga diperoleh nyala api biru. Perkiraan distribusi suhu dalam nyala api pembakar ditunjukkan pada Gambar. 3.
Sterilisasi panas kering dilakukan dalam oven pengering (oven Pasteur). Metode ini digunakan untuk mensterilkan benda kering saja - peralatan gelas laboratorium, dll. Lemari pengering (Gbr. 4) adalah lemari besi kecil berdinding ganda, di antaranya terdapat bahan isolasi termal(asbes, wol kaca). Tabung reaksi dan botol yang dicuci bersih ditutup dengan sumbat kapas; pipet, kapas, kain kasa dibungkus kertas dan diletakkan di rak lemari agar benda yang akan disterilkan tidak menyentuh dinding panas alat dan udara panas dapat menembus dengan bebas di antara benda-benda tersebut. Sterilisasi dalam lemari pengering berlangsung 45 menit - 1 jam pada suhu 160-170°. Pada suhu di atas 175°, kertas dan kapas terbakar.
Merebus dalam air menghancurkan mikroba non-spora dalam 1-3 menit. , jarum, pisau, perkakas kecil, dll. dapat direbus dalam alat sterilisasi logam dan bahkan dalam panci biasa. Menambahkan sedikit natrium bikarbonat (natrium bikarbonat) ke dalam air
Sterilisasi- infertilitas; pemusnahan mikroorganisme patogen dan non-patogen dalam bentuk vegetatif dan spora pada bahan apapun.
Mempersiapkan piring untuk sterilisasi. Barang pecah belah harus dicuci bersih dan disterilkan. Untuk mencuci, gunakan sabun atau larutan kimia deterjen. Piring baru direbus terlebih dahulu dalam larutan asam klorida 1-2% untuk menghindari pencucian kaca selanjutnya. Piring yang dicuci dengan air mengalir dibilas dengan air suling dan dikeringkan.
Tabung bakteriologis. Labu berbentuk kerucut dan matte ditutup dengan sumbat kapas, terdiri dari gulungan kapas yang dipilin rapat, ditutup dengan lapisan kain kasa. Sumbat logam berupa tutup luar juga telah dikembangkan untuk tabung reaksi bakteriologis. Perlu diingat bahwa mensterilkan sumbat kapas pada suhu tinggi menyebabkan pelepasan zat dari kapas yang menghambat pertumbuhan beberapa bakteri sensitif, seperti Brucella.
Saat memasang pipet, masukkan kapas ke ujung atas. Pipet Pasteur harus memiliki kapiler yang tertutup rapat. Setiap pipet ukur bungkus dengan selembar kertas panjang selebar 4-5 cm, mulai dari ceratnya, secara heliks sepanjang keseluruhannya. Pipet pasteur dibungkus kertas masing-masing 10-20 lembar, tabung reaksi masing-masing 15-20 lembar. Semua jenis pipet sebelum dan sesudah sterilisasi sebaiknya disimpan dalam wadah logam khusus. Sumbat pada labu juga ditutup dengan tutup kertas.
Sebelum sterilisasi, cawan Petri yang sudah bersih dan sudah dirakit dibungkus kertas, masing-masing 3 sampai 4 lembar. Setelah sterilisasi, kertas tersebut melindungi peralatan gelas steril dari kontaminasi mikroflora.
Sebelum sterilisasi, piring ditempatkan di lemari pengering tidak terlalu rapat untuk menjamin sirkulasi udara, dan dijaga agar suhu tidak melebihi 180?C, karena pada suhu yang lebih tinggi kertas dan kapas akan hangus. Setelah sterilisasi selesai, lemari pengering tidak dibuka sampai saat itu. Hingga suhu di dalamnya turun menjadi 70-80?C, karena perubahan suhu yang tajam dapat menyebabkan rusaknya kaca.
Jika peralatan dimaksudkan untuk disterilkan media nutrisi dengan autoklaf di bawah tekanan minimal 1 atm, tidak disterilkan sebelumnya. Saat mensterilkan media dengan uap yang mengalir atau dalam autoklaf dengan tekanan tidak lebih dari 0,5 atm. Wadah steril harus digunakan.
Sterilisasi dengan udara panas kering. Metode tersebut digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas yang bersih. Untuk tujuan ini, oven Pasteur digunakan - lemari pengering khusus dengan dinding ganda. Bagian luarnya dilapisi bahan tahan panas. Di bagian atas ada termometer. Elemen pemanas listrik otomatis ditempatkan di bagian bawah antara casing tahan panas dan casing logam bagian dalam. Saat lemari pengering dihidupkan, udara di dalamnya memanas. Setelah suhu yang disetel tercapai, waktu mulai sterilisasi dicatat. Cara sterilisasi: pada suhu 155-160?C - pemaparan selama 2 jam, pada 165-170?C - 1-1,5 jam, pada 180?C - 1 jam Setelah waktu sterilisasi berakhir, pemanasan dihentikan.
Autoklaf. Ini adalah sterilisasi tekanan uap yang dikombinasikan dengan suhu tinggi dalam peralatan khusus - autoklaf. Ketika uap jenuh bertemu dengan benda yang lebih dingin, uap tersebut mengembun menjadi air, melepaskan sejumlah besar panas. Selain itu, volume uap berkurang, sehingga memudahkan penetrasi ke bagian dalam bahan yang disterilkan. Prasyaratnya adalah pasokan uap yang benar-benar jenuh, sehingga kontaknya dengan benda dingin langsung menyebabkan kondensasi dan pemanasan. Industri ini memproduksi autoklaf vertikal dan horizontal.
Autoklaf vertikal adalah kuali logam silinder berdinding ganda, ditutup dengan penutup. Air dialirkan ke sela-sela dinding melalui keran khusus dengan corong hingga ketinggian tertentu. Dinding bagian dalam ketel dilengkapi dengan lubang di bagian atas dan keran di bagian bawah, yang melaluinya, ketika air dipanaskan, uap akan menggantikan udara dari ketel. Bingkai pelindung logam ditempatkan di atas autoklaf, dan harus ada ruang kosong antara autoklaf dan autoklaf itu sendiri. Autoklaf dipanaskan dengan menghubungkan ke jaringan listrik.
Autoklaf diisi dengan bahan yang akan disterilkan, tutup dan keran tempat menuangkan air ditutup, dan keran bawah dibiarkan terbuka untuk sementara. Air panas di antara dinding autoklaf mendidih, uap yang dihasilkan naik dan melewati lubang atas dinding bagian dalam ke dalam ketel, mendorong udara keluar melalui keran terbuka bawah. Ketika semua udara dipindahkan dan uap mulai keluar secara merata, katup bawah ditutup. Akibatnya tekanan uap di dalam autoklaf meningkat. Awal sterilisasi dianggap saat tekanan mencapai nilai tertentu (menurut pengukur tekanan). Panas disesuaikan selama sterilisasi, menjaga tekanan uap pada tingkat yang sama. Jika tekanan di dalam autoklaf meningkat secara berlebihan, terdapat katup pengaman yang melaluinya kelebihan uap secara otomatis akan keluar.
Ketika tekanan uap meningkat, suhu dalam autoklaf juga meningkat.
Pengukur tekanan menunjukkan tekanan uap tanpa memperhitungkan tekanan atmosfer sekitar (760 mm Hg). Setelah waktu sterilisasi habis, autoklaf dimatikan. Setelah pendinginan, ketika pembacaan pengukur tekanan nol, buka katup untuk mengeluarkan uap.
Autoklaf horizontal berbeda dengan desain vertikal, tetapi prinsip pengoperasiannya sama.
sterilisasi virologi hewan patologis
Contoh formulir yang harus diisi pada saat pengiriman bahan patologis ke laboratorium