Kromatografija na koloni je najjednostavnija opcija adsorpcijska kromatografija. Koristi se za odvajanje smjesa krutih tvari.
Kao stacionarna faza koristi se neki čvrsti adsorbent, na primjer glinica (aluminijev oksid), a kao mobilna faza neka otapala. Stakleni stupac najprije se napuni suspenzijom ove dvije faze. Na dno kolone postavljena je brtva od staklene vune kako bi se spriječilo istjecanje suspenzije (slika 6.41). Nakon što se suspenzija istaloži, otapalo se ispušta iz kolone sve dok njegova razina ne bude malo iznad razine krute faze. Čvrsta smjesa se zatim otopi u maloj količini otapala i dobivena otopina se izlije na vrh kolone. Nakon što otopina prođe kroz kolonu, doda se nekoliko obroka čistog otapala kako bi se osiguralo da razina otapala ostane iznad razine stacionarne faze. Proces prolaska otapala kroz kolonu naziva se elucija. Otapalo koje se koristi za ispiranje naziva se eluent. Razdvajanje različitih komponenti smjese događa se kako se postupno kreće duž stupca. Ako su komponente smjese obojene, poput pigmenata ili bojila, njihovo se odvajanje može uočiti vizualno. Na sl. Na slici 6.42 prikazano je kako dolazi do razdvajanja dvokomponentne smjese. Komponenta 1 ima veći koeficijent raspodjele i stoga brže prolazi kroz kolonu. Vrijeme potrebno da bilo koja komponenta smjese prođe kroz kolonu naziva se vrijeme ispiranja te komponente. Uzastopni dijelovi eluiranih komponenti skupljaju se u tikvice ili epruvete. Otapalo se može ukloniti destilacijom, što rezultira čistom komponentom. Na sl. Slika 6.42 prikazuje idealizirani slučaj potpunog odvajanja dviju komponenti.
Koristi uske stupce, visokotlačne mlaznice i vrlo brzo vrijeme odziva detektora. Zbog visokotlačni vrhovi izlaze iz stupca vrlo brzo, a brzi detektori mogu pratiti signal iz ovih vrlo uskih vrhova. Odvajanje se održava jer se koristi kapilara unutarnjeg promjera 0,1 mm. Povećana produktivnost laboratorija je vaša prednost, a veća ponovljivost dovodi do povećane točnosti vaših testova. Također se ostvaruju značajne uštede plina, s potrošnjom u korelaciji s vremenom ubrizgavanja.
Tankoslojna kromatografija
Tankoslojna kromatografija (TCX) je vrsta adsorpcijske kromatografije. Naširoko se koristi u organskoj kemiji za identifikaciju spojeva i određivanje njihove čistoće. Čvrsta adsorpcijska faza obično je silikagel, glinica ili celuloza koja sadrži neku vrstu veziva, poput škroba
Osim toga, razvojna ekspresija ovisi o okolini jer osigurava "kontekst" ili "mrežu" u kojoj novi genski proizvodi moraju djelovati. Ovaj "kontekst" uključuje kemijske, električne i strukturalne ili mehaničke napetosti, kao i stanične i organele strukture. Nitaste gljive trebale bi biti jedinstvene u ponudi, kao dio normalnog obrasca rasta jednog organizma, sposobnosti proučavanja ponašanja neovisnih stanica koje su podvrgnute vegetativnom rastu, kao i ponašanja stanica koje doprinose strukturi i razvoju kompleksa organa i tkiva.
Riža. 6.41. Kromatografija na stupcu. Riža. 6.43. Tankoslojna kromatografija (TLC).
Suspenzija takve krute tvari se tanko i ravnomjerno rasporedi po površini staklene ploče i pusti da se osuši. Blizu jednog kraja ploče, točka ispitne otopine nanosi se na adsorpcijski sloj. Da bi se olakšala identifikacija komponenata, uz to mjesto mogu se staviti i točke poznatih spojeva. Nakon što se mrlje na kraju ploče osuše, ploča se na tom kraju umoči u malu količinu otapala ulivenu u čašu ili spremnik (sl. 6.43), koji se zatim pokrije poklopcem kako bi se spriječilo isparavanje otapala. . Otapalo se polako diže uz ploču kao rezultat kapilarnog djelovanja. Kada fronta otapala prođe pjege, počinje kretanje tvari otopljenih u njima. Brzina njihovog kretanja ovisi o njihovim koeficijentima raspodjele. Kada se fronta otapala podigne do gornjeg ruba ploče, uklanja se sa stakla i suši. Različite komponente obojene smjese mogu se identificirati vizualno. Ako su komponente smjese neobojene, tada ploču treba razviti. Razvijanje ploče se postiže prskanjem nekim reagensom za bojenje, zračenjem ultraljubičastim svjetlom, zagrijavanjem ili držanjem u atmosferi nekog plina, poput jodnih para. Svaka komponenta smjese može se karakterizirati određenim koeficijentom zadržavanja Rf. Koeficijent zadržavanja Rf povezan je s koeficijentom distribucije dane komponente i određen je relacijom
Bitno preliminarno razumijevanje načina na koji se ti događaji mogu kontrolirati je uvažavanje prirode "stanica" u filamentoznim gljivama. Slobodno živuća mikrobna stanica pokazuje veliku fleksibilnost i prilagodljivost kao odgovor na okolinu, ali kontakt s okoliš toliko blizu da je koncept ponašanja stanice besmislen osim za cijeli sustav stanične okoline. To nije slučaj u stanicama tkiva, gdje organizacija i metabolizam stanica koje čine tkivo mogu uvelike odrediti okoliš pojedinačnih stanica.
Međutim, doprinos tkivu treba promatrati kao prijenos određenog gubitka slobode odgovora - smanjenje fleksibilnosti i prilagodljivosti koju pojedinačna stanica može imati - u korist koordiniranih radnji potrebnih za tkivo kao cjelinu. U većini organizama, ponašanje neovisnih stanica može se proučavati samo u većini umjetnim uvjetima proučavanjem staničnih kultura. Za gljive, vegetativni rast "nediferenciranih" stanica u obliku micelija normalan je dio životnog ciklusa.
Rf = (Udaljenost kretanja komponente od izvorne točke)/(Udaljenost kretanja otapala od izvorne točke)
stranica 3
Kromatografske kolone od nehrđajućeg čelika: kolona za odvajanje dužine 100 mm, kolona za koncentraciju dužine 50 mm, preliminarna kolona dužine 50 mm, kolona za prigušivanje dužine 50 mm, kolona za suzbijanje 200 mm (2 kom.
Međutim, isti micelij može dovesti do stvaranja plodnih tijela koja su složene strukture i izgledaju jednako masivna kao organi i tkiva viših organizama. Ova jedinstvenost, međutim, sa sobom nosi i neke poteškoće. Jedan od njih se već pojavljuje s upotrebom riječi "stanica" u gornjim paragrafima. Gljivična hifa je filament koji se sastoji od mnogo odjeljaka povezanih s krajem, ali rast hife je tako visoko polariziran da je pravi rast rasta apsolutno ograničen na vrh hife, tako da cjelokupna morfologija hife ovisi o događajima koji se događaju na njenom vrhu.
| Razdvajanje polarnih tvari korištenjem politetrafluoroetilena kao čvrstog nosača (Stashevsky i Yanak, 1962. | Ovisnost visine teorijske ploče o brzini protoka plina nosača za sterhamol i teflon (Stashevsky i Yanak, 1962.) |
Kromatografska kolona - 20% skvalan na sterhamolu (), na Teflon-6 od Du Pont (O) - Analit - heksan.
Kromatografske kolone moraju biti pripremljene na takav način da se izmjena između pokretne i stacionarne faze odvija dovoljno često i brzo. Ovi zahtjevi vrijede i za napunjene i za kapilarne kolone. Najbolje rade kada je debljina sloja obje faze mala, a ukupna površina međusklopa velika. U punjenim kolonama, ovaj zahtjev je ispunjen korištenjem grubo porozne površine fino zrnatog krutog nosača ili adsorbensa. U kapilarnim kolonama to se postiže stvaranjem ravnomjerno tankog, čvrsto pričvršćenog i stabilnog filma odgovarajuće stacionarne faze na unutarnjim stijenkama.
Hife gljiva jednako su varijabilne među vrstama kao i bilo koji drugi aspekt gljivične biologije, ali općenito govoreći, filament hife, podijeljen na odjeljke poprečnim stijenkama, ima apikalni odjeljak koji je možda do deset puta duži od subterminalnog ili interkalarnog odjeljka. Primarni septumi gljiva nastaju, uvijek pod pravim kutom u odnosu na dužu os hife, procesom sužavanja u kojem periferna vrpca mikrovlakana stupa u interakciju s mikrovezikulama i drugim membranskim staničnim organelama.
Pregrade koje dijele hife u odjeljke mogu biti potpune ili probušene velikom središnjom porom. Septalni oblik mogu modificirati hifamične stanice s obje strane septuma i mogu varirati ovisno o dobi, položaju u miceliju ili položaju u tkivima diferencirane strukture. Otvoreni hifalni septum postavlja nas pred filozofski problem: ako je stanica zatvoreni spremnik, dijele li gljivične pregrade hifu na stanice, od kojih svaka doživljava individualno postojanje, ili gljivične pregrade dijele hifu na jednostavne dijelove koji podijeliti koherentno iskustvo cijele hife?
Kromatografska kolona duga 8 L s polietilen glikolom 200 nanesenim iz 0,5% otopine na temperaturi od 20 °C imala je učinkovitost odvajanja koja odgovara 1500 teoretskih ploča po 1 m duljine. Nemodificirana kapilara pod točno istim uvjetima imala je 150 - 300 teoretskih gubitaka. Postoji li u kapilarnim stupcima ove vrste kontinuirani film, kao u Goleyevim stupcima, ili je stacionarna faza raspoređena na dispergiranoj površini, još nije točno utvrđeno.
Hifa je podijeljena na diskretne stanice, od kojih svaka ima individualno postojanje, kontrolirajući razmjenu kroz hifalne pregrade s istim stupnjem složenosti kao što neovisna pojedinačna stanica koja pripada bilo kojem od eukariotskih kraljevstava kontrolira svoju razmjenu s vanjskim svijetom. Višestanični karakter filamentoznih gljivičnih hifa ne može se dovesti u pitanje, barem u mjeri u kojoj je podijeljen u odjeljke čije su interakcije pažljivo regulirane i koje mogu pokazivati kontrastne obrasce diferencijacije; doista, predačka formacija septiranih hifa može se protumačiti kao duboka evolucijsko podrijetlo višestanični.
Kromatografska kolona je izrađena u obliku spirale od cijevi od nehrđajućeg čelika ili mesinga duljine 2 m i unutarnjeg promjera G mm.
Kromatografska kolona je središnji, temeljno važan dio kromatografskog sustava. U apstraktnom obliku, kolona se može prikazati kao cilindrična kolona stacionarne faze koja je u interakciji tijekom procesa kromatografskog odvajanja s mobilnom fazom i sorbatom otopljenim u njoj. Molekule sorbata migriraju kroz kolonu kada su u mobilnoj fazi i ostaju na mjestu kada su u stacionarnoj fazi. Što je veći afinitet sorbata za stacionarnu fazu, a manji za mobilnu fazu, to se on sporije kreće kroz kolonu i duže se u njoj zadržava. Zbog razlike u afinitetu komponenata smjese za stacionarnu i mobilnu fazu, postiže se glavni cilj kromatografije - dijeljenje smjese u zasebne koncentracijske zone (vrhove) komponenata unutar prihvatljivog vremenskog perioda dok se kreću. duž kolone s mobilnom fazom.
Osim toga, kod nitastih gljiva stvaranje hifalnih grana je jedini način da se poveća broj točaka rasta, što znači da je kod nitastih gljiva grananje hifa ekvivalent diobi stanica kod životinja i biljaka. Kinetičke analize jasno pokazuju da se rast filamentoznih gljiva može tumačiti na temelju pravilnog staničnog ciklusa. Stoga bi se filamentozne gljive trebale smatrati staničnim organizmima koji proizvode diferencirana tkiva koja se sastoje od specijaliziranih staničnih zajednica koje su potomstvo izvorne stanične populacije ili stanične populacije koja je inducirana da započne diferencijaciju.
| Shema visokotemperaturnog plinskog kromatografa. |
Kromatografska kolona je cijev od nehrđajućeg čelika duljine 70 cm i vanjskog promjera 9 5 mm, pakirana vatrostalna opeka(veličine zrna 20 - 40 mesh), koji je prethodno ispran vodom i osušen. Stup je nakon punjenja (uz kontinuirano potresanje) opekom savijen u spiralu.
Kromatografska kolona konstruirana je od dijelova cilindričnih cijevi povezanih prirubnicama.
Međutim, gljive proizvode neke izuzetno složene strukture, a njihovo proučavanje može uvelike pridonijeti našem razumijevanju razvojnih procesa. Analiza stanične diferencijacije i procesa oblikovanja uzorka može otkriti zajedničke strategije i očuvane putove, kao i alternativne mehanizme.
U praktičnijem smislu, mnogi gljivični patogeni koriste višestanične strukture u svojoj infekciji i strategijama preživljavanja, dok komercijalna vrijednost uzgojenih gljiva očito ovisi o njihovom morfogenetskom kapacitetu; Razumijevanje arhitekture i dizajna višestaničnih struktura može dovesti do poboljšanog upravljanja i tehnika rezidbe. Na biljke, životinje i gljive sada se gleda kao na tri potpuno različita kraljevstva eukariotskih organizama koja su se morala razdvojiti u evoluciji na nekoj razini mnogo prije nego što je stvorena višestanična kategorija organizacije.
| Shema kromatografske separacije s kontrolom radioaktivnosti. - kromatografska kolona. 2-krajni brojač. 3-protočna ćelija. 4 - instalacija za brojanje. 5-čaša za uzorke. 6 - stijenke olovne zaštite krajnjeg šaltera. (Vrh slike prikazuje pogled odozgo na protočnu ćeliju. |
Kromatografska kolona (s visinom sloja kationske izmjene od 25 - 30 cm), koja se pretvara u protočnu ćeliju. Otopina koja sadrži 0,02 - 0,1 mg ekvivalenta soli kobalta i željeza koja sadrži Co60 i Fe59 (aktivnost jednaka 105 imp.
Kromatografska kolona prolazi kroz protočnu ćeliju II.
Kromatografska kolona je staklena cijev tipa birete duljine 30 cm i promjera 1 cm Na vrhu cijevi nalazi se nastavak duljine 3 cm i promjera 2 cm koji predstavlja uski lijevak za punjenje kolone otopinom. .
Paralele između morfogeneze gljiva i drugih eukariotskih organizama vrijedne su pažnje kako bismo mogli graditi na konceptualnom okviru koji je već uspostavljen u nadi za razvojnim modelima koji mogu potaknuti nove pokuse s gljivičnim materijalom. Kada se to učini, a uzimajući u obzir jedinstvene aspekte gljivične strukturne organizacije, pojavljuju se iznenađujuće sličnosti u organizaciji morfogeneze između gljiva, biljaka i životinja. Nije veliko iznenađenje da postoje razlike između razvojnih pojava kod gljiva, biljaka i životinja; da postoji tako duboka sličnost koja se čini malo iznenađujućom.
Kromatografska kolona - glavna komponenta, u kojem se postiže stvarno odvajanje komponenata smjese. Stup može biti izrađen od ravnih, savijenih ili namotanih bakrenih, aluminijskih, staklenih ili cijevi od nehrđajućeg čelika. Korištenje bakrenih kolona treba biti ograničeno jer ovaj metal snažno adsorbira ili reagira s amonijakom, acetilenima itd. Uspjeh GC ovisi o izboru kolone. Kako bi se osiguralo ravnomjerno pakiranje, cijevi se prvo pune čvrstim inertnim nosačem, na koji se nanosi nehlapljiva tekućina u obliku tankog filma, a zatim se uvijaju u spiralu kako bi se povećala duljina stupaca. Kapilarni stupci su šuplje cijevi malog promjera, čije su stijenke obložene tankim filmom tekućine. Ravni stupovi su najučinkovitiji, ali kada radite u području visoke temperature uzrokuju neke poteškoće. Prilikom uvijanja cijevi u spiralu, promjer spirale trebao bi biti deset puta veći promjer cijevi. Ovaj uvjet je obavezan kako bi se smanjio utjecaj difuzije i učinka zida.
Nema sumnje da se u sve tri skupine višestaničnost razvila mnogo prije nego što su se tri evolucijske loze razdvojile u svoje karakteristične i posve odvojene oblike oblika, strukture i ponašanja. Prema tome, nekoliko, ako ikakvih, organizacija koje omogućuju višestaničnu morfogenezu mogu imati bilo kojeg zajedničkog pretka. Paralele koje izgleda postoje u osnovnoj regulaciji morfogeneze kod biljaka, životinja i gljiva sugeriraju konvergentnu evoluciju; ali ono što je još zanimljivije, a možda i zanimljivije, je implikacija da postoji samo ovaj ograničeni broj načina rješavanja problema povezanih s organiziranjem populacija stanica u određene obrasce, bez obzira na prirodu tih stanica.