Колоночная хроматография представляет собой простейший вариант адсорбционной хроматографии . Она используется для разделения смесей твердых веществ.
В качестве стационарной фазы используется какой-либо твердый адсорбент, например глинозем (оксид алюминия), а в качестве подвижной фазы-какой-либо растворитель. Стеклянную колонку сначала наполняют взвесью этих двух фаз. На дно колонки кладут прокладку из стекловаты, чтобы предотвратить вытекание взвеси (рис. 6.41). После того как взвесь осядет, растворитель выпускают из колонки до тех пор, пока его уровень не окажется чуть выше уровня твердой фазы. Затем твердую смесь растворяют в небольшом количестве растворителя и полученный раствор наливают сверху в колонку. После того как раствор пройдет через колонку, в нее добавляют несколько порций чистого растворителя, чтобы убедиться, что уровень растворителя остается выше уровня стационарной фазы. Процесс пропускания растворителя через колонку называется элюированием. Растворитель, используемый для элюирования, называется элюентом. Разделение различных компонентов смеси происходит по мере постепенного перемещения вдоль колонки. Если компоненты смеси окрашены, как, например, пигменты или красители, то их разделение может наблюдаться визуально. На рис. 6.42 показано, как происходит разделение двухкомпонентной смеси. Компонент 1 имеет более высокий коэффициент распределения и поэтому проходит через колонку быстрее. Время, необходимое для прохождения какого-либо компонента смеси через колонку, называется временем элюирования данного компонента. Последовательные порции элюированных компонентов собирают в колбы или пробирки. Растворитель может быть удален перегонкой, в результате чего получается чистый компонент. На рис. 6.42 показан идеализированный случай полного разделения двух компонентов.
Она использует узкие колонны, высокое давление форсунки и очень быстрые детектор времени отклика. Из-за высокого давления пики выходят очень быстро из колонки, и быстродействующие детекторы способны отслеживать сигнал этих очень узких пиков. Разделение сохраняется, поскольку используется капилляр с внутренним диаметром 0, 1 мм. Повышенная производительность лаборатории в ваших интересах, а большая воспроизводимость приводит к повышению точности ваших анализов. Также осуществляется значительная экономия газа, при этом расход коррелирует со временем впрыска.
Тонкослойная хроматография
Тонкослойная хроматография (TCX) представляет собой одну из разновидностей адсорбционной хроматографии. Она широко используется в органической химии для идентификации соединений и установления их чистоты. В качестве твердой адсорбирующей фазы обычно используется силикагель, глинозем или целлюлоза, содержащая какое-либо связующее вещество, например крахмал
Кроме того, экспрессия экспрессии развития зависит от окружающей среды, поскольку это обеспечивает «контекст» или «сеть», в которой должны работать новые генные продукты. Этот «контекст» включает химическую, электрическую и структурную или механическую напряженность, а также структуры клеток и органелл. Нитевидные грибы должны быть уникальными в плане предложения, как части нормальной картины роста одного организма, возможности изучения поведения независимых клеток, подвергающихся вегетативному росту, а также поведения клеток, которые вносят вклад в структуру и развитие комплекса органов и тканей.
Рис. 6.41. Колоночная хроматография. Рис. 6.43. Тонкослойная хроматография (ТСХ).
Взвесь такого твердого вещества тонко и однородно распределяют по поверхности стеклянной пластинки и дают ей высохнуть. Возле одного конца пластинки на слой адсорбента наносят пятно испытуемого раствора. Чтобы облегчить идентификацию компонентов, рядом с этим пятном могут быть также нанесены пятна известных соединений. После того как пятна на конце пластинки высохнут, пластинку опускают этим концом в небольшое количество растворителя, налитого в стакан или бачок (рис. 6.43), который затем накрывают крышкой, чтобы предотвратить испарение растворителя. Растворитель медленно поднимается по пластинке в результате капиллярного действия. Когда фронт растворителя проходит пятна, начинается перемещение растворенных в них веществ. Скорость их перемещения зависит от их коэффициентов распределения. Когда фронт растворителя поднимается к верхнему краю пластинки, ее вынимают из стакана и высушивают. Различные компоненты окрашенной смеси могут быть идентифицированы визуально. Если же компоненты смеси не имеют окраски, то пластинку следует проявить. Проявление пластинки достигается ее опрыскиванием каким-либо окрашивающим реагентом, облучением ультрафиолетовым светом, нагреванием либо выдерживанием в атмосфере какого-либо газа, например паров иода. Каждый компонент смеси может быть охарактеризован определенным коэффициентом удерживания Rf. Коэффициент удерживания Rf связан с коэффициентом распределения данного компонента и определяется соотношением
Существенным предварительным пониманием того, как эти события могут контролироваться, является оценка природы «клеток» в нитчатых грибах. Свободноживущая микробная клетка демонстрирует большую гибкость и адаптивность в ответ на ее среду, но контакт с окружающей средой настолько близок, что концепция поведения клетки не имеет смысла, если не считать всю систему сотовой среды. Это не относится к клеткам ткани, где организация и метаболизм клеток, которые составляют ткань, могут в значительной степени определять среду отдельных клеток.
Однако вклад в ткань следует рассматривать как перенос с ней некоторой потери свободы ответа - уменьшение гибкости и адаптивности, которой может обладать отдельная клетка, - в пользу согласованных действий, необходимых для ткани в целом, В большинстве организмов поведение независимых клеток может быть изучено только в самых искусственных условиях путем исследования клеточных культур. Для грибов вегетативный рост «недифференцированных» клеток в виде мицелия является нормальной частью жизненного цикла.
Rf =(Расстояние перемещения компонента от исходного пятна)/(Расстояние перемещения растворителя от исходного пятна)
Cтраница 3
Хроматографические колонки из нержавеющей стали: разделительная длиной 100 мм, концентрационная - длиной 50 мм, предварительная колонка длиной 50 мм, дросселирующая колонка длиной 50 мм, подавительная колонка длиной 200 мм (2 шт.
Тем не менее тот же самый мицелий может привести к образованию плодоносных тел, которые являются столь же сложными по структуре и кажутся столь же массивными, как и органы и ткани высших организмов. Такая уникальность, однако, приносит с собой некоторые трудности. Один из них уже встречается с использованием слова «клетка» в параграфах выше. Грибная гифа представляет собой нить, состоящую из множества отделений, соединенных между собой до конца, но гифальный рост настолько сильно поляризован, что истинный рост роста абсолютно ограничен гифамическим кончиком, поэтому вся морфология гифы зависит от событий, происходящих на ее вершине.
| Разделение полярных веществ при применении политетрафторэтилена в качестве твердого носителя (Стащев-ский и Янак, 1962.| Зависимость высоты теоретической тарелки от скорости потока газа-носителя для стерхамола и тефлона (Сташевский и Янак, 1962. |
Хроматографическая колонка - 20 % сквалана на стерхамоле (), на тефлоне-6 фирмы Du Pont (О) - Анализируемое вещество - гексан.
Хроматографические колонки должны быть приготовлены таким образом, чтобы обмен между подвижной и неподвижной фазами происходил Достаточно часто и достаточно быстро. Эти требования справедливы как для заполненных, так и для капиллярных колонок. Они выполняются лучше всего тогда, когда у обеих фаз толщина слоя мала, а общая поверхность раздела велика. В заполненных колонках это требование осуществляется с помощью грубопористой поверхности тонкозернистого твердого носителя или адсорбента. В капиллярных колонках это достигается образованием на внутренних стенках равномерно тонкой, прочно удерживающейся и стабильной пленки соответствующей неподвижной фазы.
Грибные гифы столь же переменны между видами, как и любые другие аспекты грибковой биологии, но, вообще говоря, гифальная нить, разделенная на отсеки поперечными стенками, имеет апикальный отсек, который, возможно, до десяти раз превышает длину субтерминала или интеркалярного отсеки. Грибковые первичные перегородки формируются, всегда под прямым углом к длинной оси гифы, процессом сужения, при котором периферийная лента микроволокон взаимодействует с микропузырьками и другими мембранными клеточными органеллами.
Перегородки, которые делят гифы на отсеки, могут быть полными или перфорированными большой центральной порой. Септальная форма может быть модифицирована гифамическими клетками по обе стороны от перегородки и может варьироваться в зависимости от возраста, положения в мицелии или положения в тканях дифференцированной структуры. Это открытая гифальная перегородка, которая представляет нам философскую проблему: если клетка является закрытым контейнером, грибковые перегородки делят гифу на клетки, каждый из которых испытывает индивидуальное существование, или грибковые перегородки делят гифу на простые куски, которые разделяют согласованный опыт всей гифы?
Хроматографическая колонка длиной 8 л с полиэтиленгликолем 200, нанесенным из 0 5 % - ного раствора, при температуре 20 обладала эффективностью разделения, соответствующей 1500 теоретическим тарелкам на 1 м длины. Немодифицированный капилляр при точно таких же условиях имел 150 - 300 теоретических терелок. Имеется ли в подобного рода капиллярных колонках сплошная пленка, как в голеевских колонках, или неподвижная фаза распределена на дисперсной поверхности, пока точно не установлено.
Гифа подразделяется на дискретные клетки, каждый из которых испытывает индивидуальное существование, контролируя обмены через гифальные перегородки с той же степенью сложности, что независимая отдельная ячейка, принадлежащая к любому из королевств эукариот, контролирует свои обмены с внешним миром. Многоклеточный характер нитчатой грибковой гифы не может быть поставлен под сомнение, по крайней мере, в той мере, в какой она разделяется на отсеки, взаимодействия которых тщательно регулируются и которые могут проявлять контрастные закономерности дифференциации; действительно, родовое образование септированной гифы можно интерпретировать как глубокое эволюционное происхождение многоклеточной.
Хроматографическая колонка выполнена в виде спирали из трубки нержавеющей стали пли латуни длиной 2 м и внутренним диаметром G мм.
Хроматографическая колонка - центральная, принципиально главная часть хроматографической системы. В абстрактном виде колонку можно представить как цилиндрический спой неподвижной фазы, взаимодействующий в процессе хроматографического разделения с подвижной фазой и растворенным в ней сорбатом. Молекулы сорбата мигрируют по колонке, когда они находятся в подвижной фазе, и остаются на месте, когда находятся в неподвижной фазе. Чем больше сродство сорбата к неподвижной фазе и чем меньше - к подвижной, тем медленнее он движется по колонке и тем дольше в ней удерживается. За счет различия в сродстве компонентов смеси к неподвижной и подвижной фазам достигается основная цель хроматографии разделение за приемлемый промежуток времени смеси на отдельные концентрационные зоны (пики) компонентов по мере их продвижения по колонке с подвижной фазой.
Кроме того, у мицелиальных грибов образование гифальных ветвей является единственным способом увеличения числа точек роста, а это значит, что в филаментных грибах гифальное разветвление является эквивалентом деления клеток у животных и растений. Кинетические анализы ясно показывают, что нитчатый грибковый рост можно интерпретировать на основе регулярного клеточного цикла. Таким образом, нитчатые грибы следует рассматривать как клеточные организмы, производящие дифференцированные ткани, состоящие из специализированных клеточных сообществ, которые являются потомством исходной клеточной или клеточной популяции, которая индуцируется для начала дифференциации.
| Схема высокотемпературного газового хроматографа. |
Хроматографическая колонка представляет собой трубку из нержавеющей стали длиной 70 см и наружным диаметром 9 5 мм, набитую огнеупорным кирпичом (зернением 20 - 40 меш), который предварительно промывали водой и просушивали. Колонка после заполнения (при непрерывном встряхивании) кирпичом была изогнута в спираль.
Хроматографическая колонка была сконструирована из секций цилиндрических труб, соединенных фланцами.
Однако грибы производят некоторые чрезвычайно сложные структуры, и их исследование может внести большой вклад в наше понимание процессов развития. Анализ процессов дифференцировки клеток и формирования образов может выявить общие стратегии и консервативные пути, а также альтернативные механизмы.
В более практическом смысле многие грибковые патогены используют многоклеточные структуры в своих стратегиях заражения и выживания, тогда как коммерческая ценность культивируемых грибов, очевидно, зависит от их морфогенетической способности; понимание архитектуры и конструкции многоклеточных структур может привести к улучшению методов управления и обрезки. Растения, животные и грибы теперь рассматриваются как три совершенно разных царства эукариотических организмов, которые должны были разделиться в эволюции на некотором уровне задолго до того, как была создана многоклеточная категория организации.
| Схема хро-матографического разделения с контролем по радиоактивности. - хроматографическая колонка. 2-торцовый счетчик. 3-проточная кювета. 4 - счетная установка. 5-чашечка для проб. 6 - стенки свинцовой защиты торцового счетчика. (В верхней части рисунка показан вид проточной кюветы сверху. |
Хроматографическая колонка (с высотой слоя катионита 25 - 30 см), переходящая в проточную кювету. Раствор, в котором находятся по 0 02 - 0 1 мг эквивалента солей кобальта и железа, содержащих Со60 и Fe59 (активностью, равной 105 имп.
Хроматографическая колонка, переходящая II проточную кювету.
Хроматографическая колонка представляет собой стеклянную трубку типа бюретки длиной 30 см, диаметром 1 см. В верхней части трубки сделано расширение дли ной 3 см, диаметром 2 см, представляющее собой узкую воронку для наполнения колонки раствором.
Параллели между морфогенезом грибов и другими эукариотическими организмами заслуживают внимания, чтобы мы могли использовать концептуальные рамки, которые уже были установлены в надежде на модели развития, которые могут стимулировать новые эксперименты с грибковым материалом. Когда это делается и с учетом особенностей, присущих уникальным аспектам грибковой структурной организации, между грибами, растениями и животными возникают удивительные сходства в организации морфогенеза. То, что должны быть различия между явлениями развития в грибах, растениях и животных, не является большим сюрпризом; что должно быть такое глубокое сходство, как кажется, мало чем удивительно.
Хроматографическая колонка - главная составная часть, в которой достигается действительное разделение компонентов смеси. Колонка может быть изготовлена из прямой, согнутой или свернутой в спираль медной, алюминиевой, стеклянной или из нержавеющей стали трубки. Следует ограничить изготовление колонок из меди, так как этот металл сильно адсорбирует или реагирует с аммиаком, ацетиленами и др. Успех ГХ зависит от выбора колонки. Для обеспечения равномерной набивки трубки сначала наполняют твердым инертным носителем, на который в виде тонкой пленки нанесена нелетучая жидкость, а затем скручивают в спираль для увеличения длины колонок. Капиллярные колонки - это полые трубки малого диаметра, на стенки которых нанесена тонкая пленка жидкости. Наиболее эффективными являются прямые колонки, однако при работе в области высоких температур они вызывают некоторые затруднения. При скручивании трубки в спираль диаметр спирали должен быть в десять раз больше диаметра трубки. Это условие обязательно для уменьшения влияния диффузии и стеночного эффекта.
Нет сомнений в том, что во всех трех группах многоклеточность эволюционировала задолго до того, как три эволюционные линии расходились в их характерные и совершенно отдельные формы формы, структуры и поведения. Таким образом, мало кто, если вообще есть, организации, которая допускает многоклеточный морфогенез, может быть укомплектована любым общим предком. Параллели, которые, по-видимому, существуют в основной регуляции морфогенеза у растений, животных и грибов, предполагают конвергентную эволюцию; но, что еще более интересно, и, возможно, более интересно, подразумевается, что существует только это ограниченное число способов решения проблем, связанных с организацией популяций клеток в определенные закономерности, независимо от природы этих клеток.